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操作方法

雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過(guò)夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,，下同）,。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌,。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+",、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。

用途

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí),，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度,。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體,。

同產(chǎn)品展示：