雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05 MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液,。在 4 °C 下將 0.1 ml 添加到每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中過夜,。次日，將溶液從孔中取出并用洗滌緩沖液洗滌3次,，每次3分鐘,。 （以下也清洗）。

2,、加樣：將0.1ml特定稀釋度的待測(cè)樣品加入上述包被的反應(yīng)液中,，37℃孵育1小時(shí)。然后洗,。 （同時(shí)創(chuàng)建空白孔,、陰性對(duì)孔和陽性對(duì)照孔）。

3. 酶標(biāo)抗體的加入：每個(gè)反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（滴定后稀釋）0.1ml,。在 37°C 下孵育 0.5-1 小時(shí)并洗滌,。

4、加入底物溶液顯色：在每個(gè)反應(yīng)孔中加入0.1ml臨時(shí)配制的TMB底物溶液,，37℃孵育10-30分鐘,。

5. 反應(yīng)結(jié)束：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸,。

6、結(jié)果評(píng)價(jià)：在白色背景上可以用肉眼直接觀察結(jié)果,。反應(yīng)孔越深,，陽性反應(yīng)越強(qiáng)，陰性反應(yīng)無色或極淡,。表示“-"符號(hào),。您還可以測(cè)量 OD 值。在 450 nm（ABTS 顯色時(shí)為 410 nm）使用 ELISA 檢測(cè)器,，使用空白對(duì)照孔至零,，如果大于 OD 值的 2.1 倍，則測(cè)量每個(gè)孔的 OD 值,。陰性對(duì)照為陽性,。

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