雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05 MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml,。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液。在 4 °C 下將 0.1 ml 添加到每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中過夜,。次日,，將溶液從孔中取出并用洗滌緩沖液洗滌3次，每次3分鐘,。 （以下也清洗）,。

2、加樣：將0.1ml特定稀釋度的待測樣品加入上述包被的反應(yīng)液中,，37℃孵育1小時,。然后洗。 （同時創(chuàng)建空白孔,、陰性對孔和陽性對照孔）,。

3. 酶標抗體的加入：每個反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標抗體（滴定后稀釋）0.1ml。在 37°C 下孵育 0.5-1 小時并洗滌,。

4,、加入底物溶液顯色：在每個反應(yīng)孔中加入0.1ml臨時配制的TMB底物溶液，37℃孵育10-30分鐘,。

5. 反應(yīng)結(jié)束：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸,。

6、結(jié)果評價：在白色背景上可以用肉眼直接觀察結(jié)果,。反應(yīng)孔越深,，陽性反應(yīng)越強，陰性反應(yīng)無色或極淡。表示“-"符號,。您還可以測量 OD 值,。在 450 nm（ABTS 顯色時為 410 nm）使用 ELISA 檢測器，使用空白對照孔至零,，如果大于 OD 值的 2.1 倍,，則測量每個孔的 OD 值。陰性對照為陽性,。

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