大鼠Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原 （ELISA）試劑盒

ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒,、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),，得到科研工作者的認(rèn)可及推崇,，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展,。

利用

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標(biāo)記,。固相載體表面結(jié)合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標(biāo)抗原或抗體同時(shí)保留其免疫活性和酶活性,。在測(cè)量過(guò)程中,，測(cè)試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)。在固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物通過(guò)洗滌與液體中的其他物質(zhì)分離,。然后加入酶標(biāo)抗原或抗體,，也通過(guò)反應(yīng)與固相載體結(jié)合。此時(shí),，固相上酶的量與樣品中被測(cè)物質(zhì)的量成正比,。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的多少與樣品中被測(cè)物質(zhì)的多少直接相關(guān),，因此可以進(jìn)行定性或定量分析根據(jù)顏色深度,。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,，并且該測(cè)定方法達(dá)到了高靈敏度,。 ELISA 可用于測(cè)量抗原和抗體。

怎么做

雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml,。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液,。向每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加入 0.1 ml，并在 4 °C 下孵育過(guò)夜,。次日,，棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次,，每次3分鐘,。 （簡(jiǎn)稱洗滌，下同）,。

2,、加樣：將0.1ml稀釋后的待測(cè)樣品加入上述包被的反應(yīng)孔中，37℃孵育1小時(shí),。然后洗,。 （同時(shí)制作空白孔、陰性對(duì)照孔和陽(yáng)性對(duì)照孔）,。

3,、加入酶標(biāo)抗體：在每個(gè)反應(yīng)孔中加入0.1ml新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（滴定后稀釋）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小時(shí)并洗滌,。

4 加入底物顯色液：在每個(gè)反應(yīng)孔中加入 0.1 ml 臨時(shí)配制的 TMB 底物溶液,，37°C 孵育 10-30 分鐘。

5. 反應(yīng)終止：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸,。

6,、結(jié)果判斷：在白色背景下，肉眼可直接觀察結(jié)果：反應(yīng)孔顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)無(wú)色或極淺。 “-"符號(hào)表示,。 OD值也可以測(cè)量：在ELISA檢測(cè)器上,，在450nm（ABTS顯色時(shí)為410nm）,，用空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)量各孔OD值,，如果大于2.1倍陰性對(duì)照的OD值，即陽(yáng)性。

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