實驗條件的選擇

在ELISA中,，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應,，觀察其顯色反應是否均一性,，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時,。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml,。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度,。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應,，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護,。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間,，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入,。