雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃ 過夜。次日,，棄去孔內溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌,，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）,。

3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。

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