在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,，抗原抗體反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育,，有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。

1. 為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育,？

ELISA屬固相免疫測定,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,，以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機(jī),，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,，這是一個逐步平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才能到達(dá)反響的結(jié)尾,。在這以后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。

2. 溫育常選用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃等,。

37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度,，在建立ELISA方法作反響動力學(xué)研究時,，實驗表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1～2小時,，產(chǎn)品的可達(dá)高峰,。為加快反響，可進(jìn)步反響的溫度,，有些實驗在43℃進(jìn)行,，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為,，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時刻太長,，在ELISA試劑盒中一般不予選用,。

ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴,，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡,。為防止蒸騰,，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時可讓反響板漂浮在水面上,。若用保溫箱，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布，后將ELISA板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。

無論是水浴仍是濕盒溫育,，反響板均不宜疊放,，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)厲限制在規(guī)則的范圍內(nèi),，規(guī)范室溫溫度是指20～25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。室溫溫育時,，ELISA試劑盒只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確,。為確保這一點,，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定,。