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探針法:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團,。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步,。再通過實時監(jiān)測整個PCR 進程熒光信號的積累,與標準曲線對比進行定量分析,。下圖以TaqMan探針為例: |
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