一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,，分別為7,，6，5,，4,，3，2,。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。
5. 換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
6. 換槍頭,，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。

二,、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取,，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照）,，一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL,，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC,。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,，則PC和NC的體積也必須是200μL,。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。

三,、設置qPCR反應（20 μL體系,，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照,。如果做2-3次重復,，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復,。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
注意事項：
1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織,，應盡量避免反復凍融,，否則會導致模板的降解，影響PCR效率,。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,，易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,，也可在37℃水浴中預熱10 min,，以溶解沉淀，混勻后再使用,。
3. 電泳檢測時,，切勿使用含有SDS的Loading Buffer,。否則,，電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶，影響實驗結果,。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,，以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,。

保存方式
冰袋運輸。-20℃避光儲存,，有效期一年,。本品避免反復凍融。建議分裝保存,。