Esp3I 限制性內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號：F1503S

儲存條件：-20℃

同裂酶：BsmBI, BstGZ53I, Esp16I, Esp23I

注： 同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在 5~15 分鐘內(nèi)精確完成 DNA 切割的高保真限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組DNA 等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點：5~15 分鐘內(nèi)即可完成酶切,；共用一種酶切 Buffer，大大簡化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度,， 輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外,，LABLEAD去磷酸化,、連接試劑在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接"的體驗,。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液；37℃溫育,；參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系,。

失活條件

80℃溫育 20 min。

功能活性檢測

最適反應(yīng)溫度下,，在 20ul 反應(yīng)體系中,，1ulLabFD™ Esp3I 能夠在 15min 內(nèi)消化 1ug λDNA。

超長時間溫育檢測

最適反應(yīng)溫度下,，將 1ul LabFD™ Esp3I 與 1ug λDNA 共同溫育 3h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性,。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應(yīng)溫度下,，使用 1ul LabFD™ Esp3I 消化底物，回收酶切產(chǎn)物,。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測

最適反應(yīng)溫度下,，將 1ul LabFD™ Esp3I 與 1ug 超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4h,，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài),。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

  （1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

注：本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切,，未純化的 PCR 具備一定的離子強(qiáng)度，10xLabFDTMbuffer 加入量可適當(dāng)減少至2ul,。但由于DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,，會影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,，建議酶切前對PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化,。

  （2） 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴,；

（3）37℃溫育 15min（質(zhì)粒）,，或 15~30min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60min（基因組 DNA）,；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活,，停止反應(yīng)（可選）。

2. 雙酶切或多酶切

  （1） 每種快速內(nèi)切酶的用量為 1ul,，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系,；

  （2） 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的 1/10；

（3） 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同,，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切,，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng),。

3. 適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于 20ul,，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時間，盡量使用水浴,、金屬浴或沙浴,。

不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD 限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。