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低因子基質膠-無酚紅

貨號：MG2231、MG4231,、MG6231

存儲條件：-80℃ 保存,，避免反復凍融。

產(chǎn)品簡介：

基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質,，含有豐富的細胞外基質蛋白,，主要包括層粘連蛋白、膠原IV,、肝素硫酸酯蛋白聚糖,、巢蛋白以及大量的生長因子。

基底膠在室溫條件下,，聚合形成具有生物學活性的三維基質,，模擬體內細胞基底膜的結構、組成,、物理特性和功能,，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化，以及對細胞形態(tài),、生化功能,、遷移、侵染和基因表達的研究,?；|膠也適用于類器官生長、分化,、代謝和毒理學研究,。高濃度的基質膠可以用于動物體內成瘤實驗的細胞包被。

操作方法：

一,、薄膠成膠方法：

1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,，加入濃度為 50μL/cm2,。

2 生長面積的基質膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘,，即可使用,。

二、厚膠成膠方法：

1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴,，將培養(yǎng)的細胞與基質膠混合,，用移液槍頭使其懸浮于基質中,。加入濃度150-200μL/cm² 生長面積的基質膠。

3. 在37℃放置 30 分鐘,，可成膠,。可以加入細胞培養(yǎng)的基質,，也可使細胞直接生長在膠表面,。

三、薄層包被方法：

1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。

2. 根據(jù)使用需要，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質膠,。根據(jù)實驗需要確定最佳包被濃度,。

3. 將稀釋的 基質膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面,。室溫下孵育 1 小時,。

4. 去除未結合的基質膠，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗,。

四,、類器官培養(yǎng)方法：

1. 用適量的4℃過夜解凍的基質膠重懸細胞或組織沉淀，推薦重懸密度為每 50μL基質膠懸液包含 1X10^5細胞,，重懸后可置于冰上,，重懸時間不超過 30s 以避免基質膠過早凝固?；|膠稀釋比例應在 70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質膠的結構穩(wěn)定性,。

2. 將基質膠和組織細胞的混合懸液點入預熱的24 孔板底部正中央，每孔 30μL 左右,，避免懸液接觸孔板側壁,。為防止基質膠室溫凝固，此步驟應盡快完成,。

3. 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中,，孵育 15min 左右待基質膠凝固。

4. 待基質膠wanquan凝固后,，沿壁緩慢加入類器官培養(yǎng)基,，24 孔板每孔 500uL，避免破壞已凝固結構,。

5. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

6. 每 3 天更換一次培養(yǎng)基,，更換培養(yǎng)基時應避免破壞基質膠。

五,、胚胎干細胞 ES 和誘導多能干細胞 ips 培養(yǎng)（推薦使用hES驗證款基質膠）

1. 在冰上解融一份分裝的基質膠,。

2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預冷的DMEM/F-12，并且放在冰上,。

3. 將解融的基質膠按一定稀釋比例（如1:100）加入到預冷的 DMEM/F-12中（在50 mL離心管中）,，混勻。

4. 稀釋好的基質膠溶液必須立即使用,，進行培養(yǎng)皿的包被,。推薦的包被體積參見下表。

5. 輕輕晃動培養(yǎng)皿,，將基質膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面,。

注意：如果培養(yǎng)皿的表面沒有被基質膠溶液wanquan覆蓋，則不能用于人ES和iPS細胞培養(yǎng),。

6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個小時,，不可使基質膠蒸發(fā)。

注意：如果不是立即使用,，包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質膠溶液的蒸發(fā),，包被后可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前,，至少在室溫（15 - 25°C）中放置30分鐘恢復到室溫,。

7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側傾斜，使多余的基質膠溶液在一側的邊緣匯聚,。通過移液器或者泵吸取多余的基質膠溶液,。確保包被的表面沒有被刮到。

8. 立即加入ES細胞培養(yǎng)基（例如,，6孔板每孔2 mL）,。

注意事項：

1. 收到產(chǎn)品并確認到貨情況無異常后，請將 基質膠儲存于--80℃冰箱,，短暫使用可置于--20℃冰箱,。切勿將基質膠儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存,，應避免基質膠反復凍融,。

2. 因基質膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中,，保持基質膠一直置于冰上,，所有接觸的細胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭,，分裝管等都必須預冷后使用,。

3. 所有操作均需在無菌環(huán)境下進行,，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥,。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀,。

4. 溶解時可將基質膠基質置于 4℃冰箱內冰上過夜溶解。成膠后基質膠可以在 4℃ 24－48 小時后重新呈液態(tài),。