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低因子基質膠-無酚紅
貨號：MG2231、MG4231,、MG6231
存儲條件：-80℃ 保存,，避免反復凍融。
產品簡介：
基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質,，含有豐富的細胞外基質蛋白,，主要包括層粘連蛋白、膠原IV,、肝素硫酸酯蛋白聚糖,、巢蛋白以及大量的生長因子。
基底膠在室溫條件下,，聚合形成具有生物學活性的三維基質,，模擬體內細胞基底膜的結構、組成,、物理特性和功能,，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化,，以及對細胞形態(tài)、生化功能,、遷移,、侵染和基因表達的研究?；|膠也適用于類器官生長,、分化、代謝和毒理學研究,。高濃度的基質膠可以用于動物體內成瘤實驗的細胞包被,。
操作方法：
一、薄膠成膠方法：
1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為 50μL/cm2,。
2 生長面積的基質膠,。
3. 在 37℃放置 30 分鐘，即可使用,。
二,、厚膠成膠方法：
1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴,，將培養(yǎng)的細胞與基質膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質中,。加入濃度150-200μL/cm2 生長面積的基質膠,。
3. 在37℃放置 30 分鐘，可成膠,?？梢约尤爰毎囵B(yǎng)的基質，也可使細胞直接生長在膠表面,。
三,、薄層包被方法：
1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。
2. 根據使用需要,，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質膠。根據實驗需要確定最佳包被濃度,。
3. 將稀釋的 基質膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中,，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育 1 小時,。
4. 去除未結合的基質膠,，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗,。
四、類器官培養(yǎng)方法：
1. 用適量的4℃過夜解凍的基質膠重懸細胞或組織沉淀,，推薦重懸密度為每 50μL基質膠懸液包含 1X10^5細胞,，重懸后可置于冰上，重懸時間不超過 30s 以避免基質膠過早凝固,?；|膠稀釋比例應在 70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質膠的結構穩(wěn)定性。
2. 將基質膠和組織細胞的混合懸液點入預熱的24 孔板底部正中央,，每孔 30μL 左右,，避免懸液接觸孔板側壁。為防止基質膠室溫凝固,，此步驟應盡快完成,。
3. 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育 15min 左右待基質膠凝固,。
4. 待基質膠wanquan凝固后,，沿壁緩慢加入類器官培養(yǎng)基，24 孔板每孔 500uL,，避免破壞已凝固結構,。
5. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6. 每 3 天更換一次培養(yǎng)基,，更換培養(yǎng)基時應避免破壞基質膠,。
五、胚胎干細胞 ES 和誘導多能干細胞 ips 培養(yǎng)（推薦使用hES驗證款基質膠）
1. 在冰上解融一份分裝的基質膠,。
2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預冷的DMEM/F-12,，并且放在冰上。
3. 將解融的基質膠按一定稀釋比例（如1:100）加入到預冷的 DMEM/F-12中（在50 mL離心管中）,，混勻。
4. 稀釋好的基質膠溶液必須立即使用,，進行培養(yǎng)皿的包被,。推薦的包被體積參見下表。
培養(yǎng)皿 | 稀釋后的基質體積 |
6孔培養(yǎng)板 | 1 mL/孔 |
10 mm培養(yǎng)皿 | 6 mL/培養(yǎng)皿 |
T-25培養(yǎng)瓶 | 3 mL/培養(yǎng)瓶 |
T-75培養(yǎng)瓶 | 8 mL/培養(yǎng)瓶 |
5. 輕輕晃動培養(yǎng)皿,，將基質膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面,。
注意：如果培養(yǎng)皿的表面沒有被基質膠溶液wanquan覆蓋，則不能用于人ES和iPS細胞培養(yǎng),。
6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個小時,，不可使基質膠蒸發(fā)。
注意：如果不是立即使用,，包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質膠溶液的蒸發(fā),，包被后可以在2 - 8°C放置一周,。在使用之前，至少在室溫（15 - 25°C）中放置30分鐘恢復到室溫,。
7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側傾斜,，使多余的基質膠溶液在一側的邊緣匯聚。通過移液器或者泵吸取多余的基質膠溶液,。確保包被的表面沒有被刮到,。
8. 立即加入ES細胞培養(yǎng)基（例如，6孔板每孔2 mL）,。
注意事項：
1. 收到產品并確認到貨情況無異常后,，請將 基質膠儲存于--80℃冰箱，短暫使用可置于--20℃冰箱,。切勿將基質膠儲存于自動除霜的冰箱中,。在第一次融化后請分裝保存，應避免基質膠反復凍融,。
2. 因基質膠在 10℃以上即可成膠,，在操作過程中，保持基質膠一直置于冰上,，所有接觸的細胞培養(yǎng)器皿,，移液吸頭，分裝管等都必須預冷后使用,。
3. 所有操作均需在無菌環(huán)境下進行,，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥,。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀,。
4. 溶解時可將基質膠基質置于 4℃冰箱內冰上過夜溶解。成膠后基質膠可以在 4℃ 24－48 小時后重新呈液態(tài),。
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