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高濃度低因子基質膠-含酚紅
貨號：MG2263,、MG4263,、MG6263
存儲條件：-80℃ 保存，避免反復凍融,。
產品簡介：
基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質,，含有豐富的細胞外基質蛋白，主要包括層粘連蛋白,、膠原IV,、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子,。
基底膠在室溫條件下,，聚合形成具有生物學活性的三維基質，模擬體內細胞基底膜的結構,、組成,、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化，以及對細胞形態(tài),、生化功能,、遷移、侵染和基因表達的研究,?；|膠也適用于類器官生長、分化,、代謝和毒理學研究,。高濃度的基質膠可以用于動物體內成瘤實驗的細胞包被。
操作方法：
一,、薄膠成膠方法：
1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,，加入濃度為50μL/cm2,。
2 生長面積的基質膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘,，即可使用,。
二、厚膠成膠方法：
1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細胞與基質膠混合,，用移液槍頭使其懸浮于基質中,。加入濃度為 150-200μL/cm2 生長面積的基質膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘,，可成膠,。可以加入細胞培養(yǎng)的基質,，也可使細胞直接生長在膠表面,。
三、薄層包被方法：
1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。
2. 根據使用需要，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質膠,。根據實驗需要確定最佳包被濃度。
3. 將稀釋的 基質膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中,，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面,。室溫下孵育 1 小時。
4. 去除未結合的基質膠，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗,。
四,、裸鼠成瘤實驗
1.取處于對數生長期腫瘤細胞，即細胞融合度達到80%~90%,。
2.棄去瓶內培養(yǎng)液,，用PBS清洗2遍，加入0.25%含EDTA的yimei0.8~1.0 ml中,，將培養(yǎng)瓶平放靜置1 min,，倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，在細胞逐漸變圓或有細胞脫落時加入5 mlwanquan培養(yǎng)液終止消化,。
3.吹打管輕柔吹打細胞懸液,，進行細胞計數。
4.取一定數量（每只小鼠不低于1X10^5細胞量,，最高不超過1X10^7細胞/0.1ml終濃度）細胞放入15 ml離心管中,，200×g離心3 min，棄上清液,，用已預冷的移液器及吸頭將基質膠和含10%FBS的腫瘤細胞wanquan培養(yǎng)液的1∶1混懸液加入離心管,，輕柔吹打，避免產生氣泡,，均勻重懸細胞,，冰上放置。
5.麻醉5-6w齡的裸鼠,，提前預冷微量進樣器和針頭,，用不帶針頭的 1mL 注射器將細胞和膠的混合物吸入針頭，再裝上16G-29G針頭在每只裸鼠右側背部皮下接種,，左右輕柔晃動,，預留細胞懸液空間，注射量為400 μl/只,。
6.動物經過上述處理后,，每周定期觀察裸鼠生長狀況，用游標卡尺對瘤體的長度（L）,、寬度（W）進行測量,。體積大小按公式：V=1/2LW2進行計算。
注意事項：
1.收到產品并確認到貨情況無異常后,，請將 基質膠儲存于--80℃冰箱,，短暫使用可置于--20℃冰箱。切勿將基質膠儲存于自動除霜的冰箱中,。在第一次融化后請分裝保存,，應避免基質膠反復凍融。
2.因基質膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中,，保持基質膠一直置于冰上,，所有接觸的細胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭,，分裝管等都必須預冷后使用,。
3.所有操作均需在無菌環(huán)境下進行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭,，并自然干燥,。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。
溶解時可將基質膠基質置于 4℃冰箱內冰上過夜溶解,。成膠后基質膠可以在 4℃ 24－48 小時后重新呈液態(tài),。
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