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貨物所在地:北京北京市
更新時間:2024-12-09 16:41:26
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hES/iPS驗證基質(zhì)膠
貨號:MG2277,、MG4277
存儲條件:-80℃ 保存,避免反復(fù)凍融,。
產(chǎn)品簡介:
基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質(zhì),,含有豐富的細胞外基質(zhì)蛋白,主要包括層粘連蛋白,、膠原IV,、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子,。
基底膠在室溫條件下,,聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細胞基底膜的結(jié)構(gòu),、組成,、物理特性和功能,,有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化,以及對細胞形態(tài),、生化功能,、遷移、侵染和基因表達的研究,?;|(zhì)膠也適用于類器官生長、分化,、代謝和毒理學(xué)研究,。高濃度的基質(zhì)膠可以用于動物體內(nèi)成瘤實驗的細胞包被。
操作方法:
一,、薄膠成膠方法:
1. 凍融后,,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,,加入濃度為 50μL/cm2,。
2 生長面積的基質(zhì)膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘,,即可使用,。
二、厚膠成膠方法:
1. 凍融后,,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀,。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴,將培養(yǎng)的細胞與基質(zhì)膠混合,,用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中,。加入濃度為 150-200μL/cm2 生長面積的基質(zhì)膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘,,可成膠,。可以加入細胞培養(yǎng)的基質(zhì),,也可使細胞直接生長在膠表面,。
三、薄層包被方法:
1. 凍融后,,用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀,。
2. 根據(jù)使用需要,采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠,。根據(jù)實驗需要確定最佳包被濃度,。
3. 將稀釋的 基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中,包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育 1 小時,。
4. 去除未結(jié)合的基質(zhì)膠,,用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。
四,、胚胎干細胞 ES 和誘導(dǎo)多能干細胞 ips 培養(yǎng)
1. 在冰上解融一份分裝的基質(zhì)膠,。
2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預(yù)冷的DMEM/F-12,并且放在冰上,。
3. 將解融的基質(zhì)膠按一定稀釋比例(如1:100)加入到預(yù)冷的 DMEM/F-12中(在50 mL離心管中),,混勻。
4. 稀釋好的基質(zhì)膠溶液必須立即使用,,進行培養(yǎng)皿的包被,。推薦的包被體積參見下表。
培養(yǎng)皿 | 稀釋后的基質(zhì)體積 |
6孔培養(yǎng)板 | 1 mL/孔 |
10 mm培養(yǎng)皿 | 6 mL/培養(yǎng)皿 |
T-25培養(yǎng)瓶 | 3 mL/培養(yǎng)瓶 |
T-75培養(yǎng)瓶 | 8 mL/培養(yǎng)瓶 |
5. 輕輕晃動培養(yǎng)皿,,將基質(zhì)膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面,。
注意:如果培養(yǎng)皿的表面沒有被基質(zhì)膠溶液wanquan覆蓋,則不能用于人ES和iPS細胞培養(yǎng),。
6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個小時,不可使基質(zhì)膠蒸發(fā),。
注意:如果不是立即使用,,包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質(zhì)膠溶液的蒸發(fā),包被后可以在2 - 8°C放置一周,。在使用之前,,至少在室溫(15 - 25°C)中放置30分鐘恢復(fù)到室溫。
7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側(cè)傾斜,,使多余的基質(zhì)膠溶液在一側(cè)的邊緣匯聚,。通過移液器或者泵吸取多余的基質(zhì)膠溶液。確保包被的表面沒有被刮到,。
8. 立即加入ES細胞培養(yǎng)基(例如,,6孔板每孔2 mL)。
注意事項:
1. 收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無異常后,,請將基質(zhì)膠儲存于-80℃冰箱,,短暫使用可置于-20℃冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲存于自動除霜的冰箱中,。在第一次融化后請分裝保存,,應(yīng)避免基質(zhì)膠反復(fù)凍融。
2. 因基質(zhì)膠在10℃以上即可成膠,,在操作過程中,,保持基質(zhì)膠一直置于冰上,所有接觸的細胞培養(yǎng)器皿,移液吸頭,,分裝管等都必須預(yù)冷后使用,。
3. 所有操作均需在無菌環(huán)境下進行,試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,,并自然干燥,。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
4. 溶解時可將基質(zhì)膠基質(zhì)置于 4℃冰箱內(nèi)冰上過夜溶解,。成膠后基質(zhì)膠可以在 4℃ 24-48 小時后重新呈液態(tài),。
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