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Firefly Luciferase Assay Kit（螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒）

貨號：DR024-100T

儲存條件

-80℃保存,。螢火蟲螢光素酶檢測液（B+C）混合液不可反 復(fù)凍融，建議進行小批量分裝,，并于-20℃（最長可儲存1個月）或-80℃（最長可儲存 1 年）條件下儲存,。

產(chǎn)品介紹

真核基因表達調(diào)控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報告基因檢測zui常用的有效手段,。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化,，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報告基因在哺乳動物細胞中的表達提供快速,、靈敏,、穩(wěn)定的檢測方法。能夠檢測最di 10-20 mol 的螢光素酶,，在 10-14 至 10-20 mol 的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系,。

產(chǎn)品優(yōu)點

1. 快速：細胞裂解在 10-15 min 內(nèi)完成。

2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單,。

3. 靈敏：能夠檢測最di10-20 mol 的螢光素酶,。

4. 酶的濃度線性范圍可達 8 個數(shù)量級。

使用方法

1. 細胞裂解

（1）將轉(zhuǎn)入報告基因的細胞中的培養(yǎng)基移除,，加 PBS 輕輕洗滌（貼壁細胞可直接進行此操作,，懸浮細胞要離心收集細胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用無菌水按 4:1 稀釋A 組分),，然后將培養(yǎng)板放在微型震蕩器上室溫震蕩 15 min,，充分裂解細胞。

注：裂解產(chǎn)物可室溫保存 6 h,，-70℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）,。

（2）將充分裂解后的裂解產(chǎn)物，10000-15000 rpm 離心 3-5min,。離心后將上清液移入新的 EP 管中進行后續(xù)檢測,。

2. 螢光素酶檢測

（1）按照儀器說明書將熒光測定儀打開,，設(shè)定參數(shù),，測定時間為 10 s,，測定間隔為 2 s。

（2）將細胞裂解產(chǎn)物按照 20~100 µL 的體積加入測量管中（保持每次樣品量一致），另外加入 100 µL 螢火蟲螢光素酶檢測液，充分混勻后測定 RLU（Relative light unit）,。

注：螢火蟲螢光素酶檢測液不能反復(fù)凍融,，若單次實驗用量較少，建議按照單次使用量分裝成小規(guī)格,。

注意事項

1. 溫度會對酶的活性產(chǎn)生影響,，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用,。

2. 如果單管熒光測定儀測定,，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)保持一致。

3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的zui強波長為 560 nm,。

4. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5. 本產(chǎn)品僅用于科研,。