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LabFect 原代細胞小核酸轉染試劑
貨號：T1014
存儲條件：4°C保存,，超一個月不用于-20°C儲存,，避免反復凍融。-20℃保存條件下,，有效期為1年,。
產品說明：
可用來轉染 siRNA、miRNA mimics,、miRNA inhibitor 等 200bp以內的小分子RNA,，可轉染絕大多數(shù)原代細胞。目前,，無論國外還是國內,，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑,。LabFect 能夠高效轉染絕大多數(shù)原代細胞,，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲,，LabFect 也能獲得較為理想的轉染結果,。對于大多數(shù)原代細胞,，LabFect的細胞轉染陽性率都在 80%以上，而轉染細胞死亡率不到 10%,。LabFect的使用也極其簡便,，先將 sRNA與 LabFect室溫混合，再將 siRNA-LabFect混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞,，血清對轉染效果沒有影響,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。
產品特點：
原代細胞轉染性能：細胞轉染陽性率一般在80%以上,，基因敲除效果明顯,，肝細胞 Lamin A/C 基因敲除效lv在95%以上；
極低的細胞毒性：轉染細胞死亡率不到 10%,，大大降低了因細胞毒性 對實驗結果的影響；
轉染細胞范圍廣,，絕大多數(shù)原代細胞都能獲得比較理想的轉染結果,。
應用：
siRNA 轉染
miRNA mimics 轉染
200bp內的小分子RNA轉染
操作步驟：
本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格,，表格給出的是每孔的用量與體積,。
1. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔500μl培養(yǎng)基,，使細胞在轉染時密度在30-50%,，盡量不要使用抗生素。
2. siRNA-LabFect混合物準備：
a. 12pmol siRNA用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋,。
b. 2μl LabFect 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋,。輕輕混勻，室溫孵育 5min,。注意：確保在25 min內執(zhí)行第三步操作,，不要過于延遲。
c. 孵育5min后,，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）,。輕輕混勻，室溫孵育20 min,。
3. 將混合物加到培養(yǎng)的細胞內（wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：
a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內,，培養(yǎng)孔內含有0.5ml培養(yǎng)的細胞。輕輕晃動培養(yǎng)板,，混勻,。
b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h，檢測基因抑制效果,。如果需要,，細胞培養(yǎng) 4-6h 時可以更換培養(yǎng)基,，但不是必須。孵育時間的長短,，取決于細胞類型,、 所干擾基因本身及分析方法?？稍O置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間,。
轉染實驗優(yōu)化：為了提高轉染效lv，最好對轉染條件進行優(yōu)化,，特別是首ci使用,。例如：24孔培養(yǎng)板，調整siRNA與LabFect試劑的用量,。siRNA用量在在 6,、12、18,、24,、30 pmol (final concentration 10-50 nM)之間調整，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調整,。
轉染實驗要點：
轉染過程盡量不要使用抗生素,，否則會導致細胞死亡增加；
首ci實驗 siRNA 的用量設置在終濃度 10nM,、20nM,、30nM、40 nM,、50 nM 進行摸索 ,，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結果修改。
質量控制
本產品經(jīng)嚴格的質量檢驗證明,，無生物污染
注意：
本產品僅用于科研實驗
LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
Surface area/well | Vol. of growth medium | Vol. of dilution medium | siRNA Amount | LabFect | |
(cm2) | (µl) | (µl) | (pmol) | (µl) | |
96-well | 0.3 | 100 | 2 x 10 | 2.4 | 0.4 |
48-well | 0.8 | 250 | 2 x 25 | 6 | 1 |
24-well | 2 | 500 | 2 x 50 | 12 | 2 |
12-well | 4 | 1000 | 2 x 100 | 24 | 4 |
6-well | 10 | 2500 | 2 x 250 | 60 | 10 |
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