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LabFect 原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：T1014

存儲(chǔ)條件：4°C保存,，超一個(gè)月不用于-20°C儲(chǔ)存,，避免反復(fù)凍融。-20℃保存條件下,，有效期為1年,。

產(chǎn)品說明：

可用來轉(zhuǎn)染 siRNA,、miRNA mimics,、miRNA inhibitor 等 200bp以內(nèi)的小分子RNA,，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi),，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題,，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。LabFect 能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,，獲得比較理想的基因敲除效果,。甚至對(duì)一些活體寄生蟲幼蟲，LabFect 也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果,。對(duì)于大多數(shù)原代細(xì)胞,，LabFect的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在 80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%,。LabFect的使用也極其簡(jiǎn)便,，先將 sRNA與 LabFect室溫混合，再將 siRNA-LabFect混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞,，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒有影響,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率一般在80%以上，基因敲除效果明顯,，肝細(xì)胞 Lamin A/C 基因敲除效lv在95%以上,；

極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%，大大降低了因細(xì)胞毒性 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,；

轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣,，絕大多數(shù)原代細(xì)胞都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。

應(yīng)用：

siRNA 轉(zhuǎn)染

miRNA mimics 轉(zhuǎn)染

200bp內(nèi)的小分子RNA轉(zhuǎn)染

操作步驟：

本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格,，表格給出的是每孔的用量與體積。

1. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞,，每孔500μl培養(yǎng)基,，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%，盡量不要使用抗生素,。

2. siRNA-LabFect混合物準(zhǔn)備：

a. 12pmol siRNA用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋,。

b. 2μl LabFect 用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻,，室溫孵育 5min,。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲,。

c. 孵育5min后，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）,。輕輕混勻,，室溫孵育20 min。

3. 將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi),，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞,。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，混勻,。

b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h,，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要,，細(xì)胞培養(yǎng) 4-6h 時(shí)可以更換培養(yǎng)基,，但不是必須。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短,，取決于細(xì)胞類型,、 所干擾基因本身及分析方法?？稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定最佳孵育時(shí)間,。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)優(yōu)化：為了提高轉(zhuǎn)染效lv,，最好對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是首ci使用,。例如：24孔培養(yǎng)板,，調(diào)整siRNA與LabFect試劑的用量。siRNA用量在在 6,、12,、18、24,、30 pmol (final concentration 10-50 nM)之間調(diào)整,，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調(diào)整。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素,，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加,；

首ci實(shí)驗(yàn) siRNA 的用量設(shè)置在終濃度 10nM、20nM,、30nM,、40 nM、50 nM 進(jìn)行摸索 ,，后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修改,。

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)證明，無(wú)生物污染

注意：

本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels