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熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽594(遠(yuǎn)紅)

產(chǎn)品貨號：G0052  

Abs/Em (nm)：555/565

存儲溫度：-20℃干燥,、避光保存，有效期見外包裝,。若配制成水溶液,，應(yīng)小量分裝保存。

注意事項

本產(chǎn)品為凍干粉形式,，微量不易觀察,，使用前請瞬時離心，加適當(dāng)溶劑溶解后使用,，溶解后的溶液近乎透明色,。

產(chǎn)品簡介

鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結(jié)合于F-肌動蛋白的雙環(huán)肽,。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布,。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，在半guang氨酸和se氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu),。在pH升高時,，該硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力,。

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可在納摩爾水平染色F-肌動蛋白,。在各種植物細(xì)胞或動物細(xì)胞中，標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對大,、小細(xì)絲具有相似的親和力,，平均每個肌動蛋白亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子。不同于抗體,，鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白的結(jié)合親和力在不同物種間沒有顯著變化,。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區(qū)域之間的對比度非常大,。鬼筆環(huán)肽將單體/聚合物的平衡轉(zhuǎn)向聚合狀態(tài),，將聚合臨界濃度降低至30倍。Phallotoxins可通過抑制細(xì)胞松弛素的解聚,， 碘化jia和升高的溫度,，穩(wěn)定 F-肌動蛋白，,。因為鬼筆環(huán)肽綴合物很小,，大約直徑12-15埃，分子量<2000道爾頓,，多種肌動蛋白結(jié)合蛋白,，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白結(jié)合,。更重要的是,， 鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白絲保持功能,，標(biāo)記甘油肌纖維仍然收縮，標(biāo)記的肌動蛋白絲仍然可以繼續(xù)移動,。而且熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可用于對細(xì)胞中 F-肌動蛋白進(jìn)行定量研究。

實驗方法

儲液制備

熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末,，制備成200 T/mL的儲液（300T規(guī)格染料加入1.5 mL的液體,，50T規(guī)格染料加入0.25 mL的液體即可）。

熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量,。 對于熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,，使用時的推薦稀釋比例為1:40-1:200，一個單位相當(dāng)于200 μL總?cè)旧w積中加入1-5 μL 200T/mL儲備溶液,。

注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。

固定細(xì)胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或8孔室玻片上的貼壁細(xì)胞的染色步驟。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片,。

1. 用PBS清洗細(xì)胞3次,。

2. 用含有3.75％甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞，冰上固定15 min,。

注意：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白,。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛,。

3. 用PBS清洗細(xì)胞3次,。

4. 用含0.5％Triton X-100的PBS溶液在室溫下透化細(xì)胞10 min。

5. 用PBS清洗細(xì)胞3次,。

6. 用200μL PBS稀釋1-5 μL熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽儲液,，加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育20min,，進(jìn)行染色,。

注：染色體積可根據(jù)樣本情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā),，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi),。

7. 用PBS清洗細(xì)胞2-3次。

8. 熒光顯微鏡觀察,。標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定,，樣品可以在PBS中成像，但為了效果zui 佳,，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察,。

活細(xì)胞染色

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性，因此沒有被廣泛用于活細(xì)胞標(biāo)記,。然而,，有報道稱活細(xì)胞可能通過胞飲或未知機(jī)制進(jìn)行標(biāo)記,。一般來說，染色活細(xì)胞時需要更多的染料,?；蛘撸瑹晒鈽?biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細(xì)胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細(xì)胞運動,。