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蛋白快速銀染試劑盒

貨號(hào)：P1027-20T

存儲(chǔ)條件：常溫，6個(gè)月有效

產(chǎn)品簡介：

蛋白快速銀染試劑盒是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒,，該試劑盒含有增敏步驟,，可明顯降低背景,。其優(yōu)點(diǎn)還在于：1、操作簡單快速,；2,、用于2D凝膠的銀染，并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜檢測(cè),；3,、目的條帶清晰：4、不含甲醇,。

蛋白快速銀染試劑盒操作速度更快,。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1,、水平搖床或側(cè)擺搖床

2,、去離子水（超純）

3、乙醇,、冰乙酸

操作步驟(僅供參考)：

1,、準(zhǔn)備工作：以下操作以 8.5x5.5cm、 厚度為 1.0mm 的凝膠為例,，以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn),，一股用量是 25ml，對(duì)于凝膠體積較大的,，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大,。整個(gè)銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60~70rpm,。提前配制固定液即按無水乙醇冰乙酸;去離子水=5-1:4的比例配制,。提前配制洗滌液，即按無水乙醇;去離子水=1:4的比例配制,。

2,、水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗2次,，每次5min.

3,、固定：取凝膠放入50~100ml 固定液中，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 15~20min,，重復(fù)固定步驟1次,。

4、洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗2 次,，每次 5min,。

5,、水洗：去離子水清洗凝膠2次，每次 5min,。

6,、增敏：配制銀染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1ml 加入到 50ml去離子水中,，混勻,，即為 1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完,。室溫下用 1xSilver Stain Sensitizer 育凝膠 2min,，立即用去離子水清洗凝膠2次，每次1min,。

7,、銀染：配制銀染工作液，即取Silver Stain(100 x)0.5m1 加入到50ml 去離子水中,，混勻,，即得 1× Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完,。 取凝膠入 1 xSilver Stain,， 在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 10~20min。

8,、水洗：棄液,，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s,， 搖動(dòng)速度在 60~ 70rpm總的水洗時(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。

9,、顯影：配制銀染顯影工作液,，即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去離子水中，混勻,，即為 1x Siver Stain Developer,一般應(yīng)30min內(nèi)用完,。清洗凝膠后，立即置于 1x Silver Stain Developer 中,，室溫聯(lián)育2~10min,，直至蛋白條帶清晰可見。

般顯色305/后就會(huì)出現(xiàn)棕色沅淀,，繼續(xù)顯影 2-3min,， 亦可延長至 5min 以上，如果顯影效果不佳,，可重新更換 1xSilver Stain Developer繼續(xù)顯影,。

10,、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色,。立即加入銀染終止液,，搖床上搖動(dòng) 10min，以終止顯色反應(yīng),。（配制銀染終止液,，即取 Silver Stain Stop Buffer(10x)10ml加入到 90ml 去離子水中，混勻,，即為 1x Silver Stain Stop Buffer,，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)

11,、保存：棄終止液,，加入去離子水50ml，搖床上搖動(dòng)2-5min,，棄液,。短期保存于新鮮去離子水，長期保存可制備干膠,。

注意事項(xiàng)

1,、背景過深：①顯色時(shí)間過長；②洗滌不充分：③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈,；④去離子水的純度過低,！

2、蛋白條帶較淺：①蛋白的半guang氨酸含量過低：②銀染后水洗時(shí)間過長：③蛋白量較低;④固定后的洗滌時(shí)間不夠,，導(dǎo)致乙酸殘留,。

3、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡：①凝膠沒有被充分漫沒,，應(yīng)加入足量溶液：②容器沒有清洗干凈,；③凝膠接觸金厲物質(zhì)；④指紋或其他壓跡,。