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反轉錄試劑盒（Primer Flexible）
產品貨號：F0202O
存儲條件：-20°C
產品組分：
組分 | 規(guī)格 |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 400 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 100 μl |
Random hexamers (50 μM) | 100 μl |
Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
產品簡介
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便減少污染的高質量一鏈cDNA合成預混液,， 包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應 Buffer,、RNA 酶抑制劑,、dNTPs等一鏈 cDNA 合成所需的多種組分，還需加入RNA 模板,、引物和水即可開始反應,，操作非常方便。針對不同實驗設計可靈活使用不同類型的逆轉錄引物,，滿足多樣化的實驗需求,，可根據(jù)不同實驗場景選擇Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers。使用該逆轉錄預混液 15 分鐘內最長可獲得12 kb大小的cDNA,。
使用方法
1.于冰上配制如下反應體系：
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 4 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 1 μl |
或 Random hexamers (50 μM) | 1 μl |
或 Gene Speci?c Primers (50 μM) | 0.1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a.推薦使用試劑盒提取的已去除基因組 DNA 污染的高質量 RNA 作為模板,。
2.輕柔吸打混勻，瞬離,；
3.55℃溫育 15 min,；
注：若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構，可預先 25℃溫育 10 min,。
4.反應結束后,，85℃溫育 5 min 以終止反應；
5.將獲得的cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實驗,；或立即保存于 -20℃。
注：
1.后續(xù)實驗為克隆實驗,，若RNA 來源于真核生物,，只需使用 Oligo (dT) VN 即可， 加入 Random hexamers 會降低全長 cDNA 的產量,；若 RNA 來源于原核生物,，只需使用 Random hexamers 或 Gene Speci?c Primers。
2.后續(xù)實驗為qPCR,，請同時加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以獲得mRNA不同位置逆轉錄效率均一的cDNA,。
注意事項
為了防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)域潔凈,；操作時需穿戴干凈的手套,、口罩；實驗所用的離心管,、槍頭等耗材均需保證 RNasefree,。
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