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      RIPA裂解液（中）

貨號：R1090-100ml

保存條件：-20℃,。

產(chǎn)品簡介：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液,。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等,。
RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate,，0.1% SDS,，以及sodium orthovanadate，odium fluoride,，EDTA,，leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍捉到?。

注意事項：    

1、為取得良好的使用效果,，盡量避免過多的反復(fù)凍融,。可以適當(dāng)分裝后使用,。

2,、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

使用說明：

對于培養(yǎng)細胞樣品：  

1.融解RIPA裂解液,，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1mM,。

2.對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,，細胞就會被裂解,。

3.對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散,。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀,。如果細胞量較多,，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解,。

4.充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。

裂解液用量說明：

通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升,。

對于組織樣品：

1.把組織jian切成細小的碎片,。

2.融解RIPA裂解液，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM,。

3.按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高

濃度的蛋白樣品,，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。)

4.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解,。

5.充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清,，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作。

6.如果組織樣品本身非常細小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器,，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB,、p53等時,，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。

相關(guān)產(chǎn)品

BCA蛋白定量試劑盒   貨號B5000

注意事項:

為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

本品僅用于實驗研究,。