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CelRed核酸染料
  • CelRed核酸染料

貨物所在地:北京北京市

更新時(shí)間:2024-10-08 21:00:07

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CelRed核酸染料無毒性,靈敏度高,穩(wěn)定性高,,信噪比高,操作簡單,, 適用范圍廣,,與EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置

CelRed(10000*)核酸染料


貨號CR001

儲(chǔ)存條件 4℃避光可保存12個(gè)月,。

CelRed核酸染料特點(diǎn)

無毒性:CelRed 的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),,艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果也表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB,。

靈敏度高:適用于各種大小片段的電泳染色,,對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

穩(wěn)定性高:適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠,;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定,,耐光性強(qiáng)。

信噪比高:樣品熒光信號強(qiáng),,背景信號低。

操作簡單:與 EB 一樣,,在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解,;而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗 ,即可直接用紫外凝膠透射儀觀察,。

適用范圍廣:可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法),;適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳;可用于 dsDNA,、ssDNA 或 RNA 染色,。

EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置:標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用,,使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,,在 300nm 紫外光附近可得到激發(fā)。但是CelRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長的可見光*激發(fā),,因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng),。


CelRed核酸染料使用方法簡介

1.膠染法(用法同EB)(推薦方法)

1) 制膠時(shí)加入CelRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL CelRed 10,000× 儲(chǔ)液,以此比例類推)。

2) 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳,。

注意事項(xiàng):

u此方法染色染料用量相對較少,。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

u由于CelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻,。也可以選擇將CelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠,。CelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液,。

u如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān),。如果染色后問題依舊存在,,則說明問題與染料無關(guān),請嘗試:降低瓊脂糖濃度,;選用更長的凝膠,;延長凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色,。

u此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,,對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。


2 .泡染法

1)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳,。

2)用H2O將CelRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,,制成3× 染色液。(例如將15μL CelRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中),。

3)將凝膠小心地放入合適的容器中,,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠,。室溫振蕩染色30min左右,,染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,,染色時(shí)間通常介于30min到1h,,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

4)用 302nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果,。

注意事項(xiàng):

u用泡染法染色時(shí),,染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右,。

u3× CelRed染色液可以大量制備,,在室溫下避光保存直至用完,。


3.核酸電泳的PAGE步驟:

1)將TBE制備的凝膠放入電泳槽中,用夾子夾住邊緣,。

2)用配置凝膠溶液同一批次的5×TBE灌滿緩沖液槽,。用注射器排除凝膠底部的氣泡。

3)用注射器吸取1×TBE沖洗加樣孔,。將DNA樣品和適量的6×凝膠上樣緩沖液混合,,用微量移液管加入加樣孔。

4)將電極與電源相連(正極接下槽),,打開電源一般90V,;1~8V/cm。進(jìn)行電泳9h,。

5)電泳至標(biāo)準(zhǔn)參照染料遷移至所需位置(一般是電泳到二甲苯*遷出,,溴酚藍(lán)距底邊

2~3cm停止)。關(guān)閉電源,,拔掉插頭,,棄去電泳槽中的電泳液。

(6)將凝膠取下來放入,,染色皿中,,加3XCelRed的1X緩沖液中的振蕩染色30-60分,放

置在紫外檢測即可,。

注意事項(xiàng):

lPAGE 膠與瓊酯糖凝膠不同,,不能用預(yù)染或點(diǎn)染的方法;只能用泡染的方法顯色,,由于聚丙烯酰胺比較致密,,染料不容易深入,顯色效果沒有瓊酯糖凝膠好,。


特別提醒:

u 如果您使用的是紫外成像儀,,請選擇CelRed;如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測,,請選擇CelGreen。

u 在極少數(shù)情況下,,質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會(huì)出現(xiàn)拖尾和分辨率降低,,此時(shí)建議同時(shí)嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。




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