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HA-Magnetic 免疫沉淀試劑盒（PROCAP HA-Magnetic IP/CoIP KIT）

貨號：PHM025

存儲條件：IP buffer存儲于-20°C,，HA-Magnetic beads可在4℃保存1年,，或在-80℃長期保存。請根據(jù)各組分適合儲存條件存放，并避免反復(fù)凍融,。

試劑盒組分：

產(chǎn)品簡介：

LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的納米抗體開發(fā)的；納米抗體由傳統(tǒng)抗體的重鏈可變區(qū)（VHH）組成,，具有分子量小,、親和力高、特異性強,，且耐酸堿高溫環(huán)境等特點,；基于納米抗體的優(yōu)點，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀結(jié)果出現(xiàn)輕重鏈污染的現(xiàn)象,，并且節(jié)省實驗時間,。

實驗步驟：

提示：盡量在4℃進行操作，洗脫蛋白方法一除外,。

1.收集細胞：

根據(jù)實驗要求收集適量的細胞,，通常每個免疫沉淀反應(yīng)大約使用 10⁶-10⁷ 個細胞。

2.植物組織裂解處理：

取適量植物組織樣本（葉片等）放置于冷凍液氮中,，之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進行研磨,，盡可能充分研磨破壞其細胞壁。加入500-1000ul RIPA 裂解液（已加蛋白酶抑制劑 PMSF 等）進行裂解,，為了提高裂解效率,，加入 200ul 玻璃粉充分震蕩 30min，裂解完成后 12000 rpm,，離心 30min,，吸取上清 置新的離心管中，棄去沉淀,。

3. 裂解細胞：

根據(jù)實驗要求選擇使用溶液A或溶液B裂解細胞,。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制劑，用500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B重懸細胞,；置于冰上30分鐘,，可每10分鐘充分吹打一次；4℃,，20,000g離心15分鐘,，將裂解產(chǎn)物（上清）轉(zhuǎn)移到一個新的預(yù)冷管中，丟棄沉淀,。

4. 平衡珠子：

振蕩充分混勻珠子,， 吸取40μl HA-Nanoab-Magnetic beads到500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B中，4℃,，2,500g離心2分鐘,，或利用磁性分離,，丟棄上清液。

5. 結(jié)合蛋白：

將平衡好的beads加入到細胞裂解產(chǎn)物中,，于4℃旋轉(zhuǎn)混合結(jié)合30min-1h,。

6. 清洗珠子：

根據(jù)實驗要求選擇使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃,，2,500g離心2分鐘,，或利用磁性分離，丟棄上清液,。用500μl預(yù)冷的溶液C或溶液D重懸beads,，4℃，2,500g條件下離心2分鐘,，或利用磁性分離,，丟棄上清液并重復(fù)洗滌3次。

7.洗脫蛋白

方法一：

加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸beads,。95℃,，加熱10min充分變性，2,500g離心2分鐘或利用磁性分離收集上清,，收集的產(chǎn)物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析,。

方法二：

加入溶液E洗脫結(jié)合的蛋白，孵育時間30秒,，期間不斷混勻,，2,500g離心2分鐘或利用磁性分離收集上清，為了中和酸性的甘氨酸,，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）,。

注意：為了提高洗脫效率可以重復(fù)這一步。收集的產(chǎn)物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析,。

注意事項：

1、關(guān)于裂解液與裂解液的選擇：

裂解液A為溫和裂解液,，裂解液B為強裂解液,，請根據(jù)自己實驗樣本選擇相應(yīng)的裂解液，如：若為胞質(zhì)蛋白可選裂解液A或者A與B混合使用,，若為核蛋白則可選擇裂解液B,。

漂洗液C和漂洗液D的選擇（裂解液D為高鹽溶液，可能會破壞蛋白間較弱的相互作用）,，若兩個蛋白相互作用強,，同時想減少非特異性，可選D,；若兩個蛋白相互作用弱的優(yōu)先C,。

2、盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當分裝后使用,。

3、本產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品。

4,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。