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2x Taq PCR Mix（含染料）
產品貨號：T0211
存儲條件：-20℃保存
產品說明
Taq PCR Mix (含染料) 的濃度為 2×,，使用方便快捷,，能減少 PCR 操作過程中的污染，使用時只需取適量 2×Taq PCR Mix (含染料),，加入模板和引物,，并加入 ddH2O 補足體積，使反應體系濃度為 1×,，即可進行 PCR 反應,。該 Mix 中的 Taq 為篩選獲得的突變體 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase，能夠高效擴增 ≤5Kb 的 DNA 片段,，具有良好抑制劑耐受能力,，其擴增速度約為普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍,，因此可大幅度減少 PCR 延伸過程所需要的時間,，達到縮短整個 PCR反應的目的。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶,，Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq,，不易出現(xiàn)電泳條帶彌散、拖帶或者片段大小改變等狀況,。本 PCR Mix 中包含兩種染料,，PCR 產物無需添加 Loading Buffer 可直接點樣電泳，且電泳過程中會出現(xiàn)紫色和黃色兩個指示條帶,。該染料不影響 PCR 擴增效率,，但對于需要對 PCR 產物進行吸光度、熒光等光學分析的實驗,，建議在分析前對 PCR 產物進行純化,。PCR產物 3' 端帶 A 堿基,，純化后可直接用于 T/A 克隆。
質量控制
核酸內切酶殘留檢測
將酶液與超螺旋質粒 DNA 在 37℃ 溫育 4h,，通過 DNA 電泳檢測質粒無變化,。
核酸外切酶殘留檢測
將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃ 溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化,。
穩(wěn)定性測試
室溫存放一周,，無明顯活性改變。
功能檢測
以擬南芥基因組 DNA 和人基因組 DNA 為模板,，擴增 5kb 片段,，30 個循環(huán)后經瓊脂糖凝膠電泳檢測可見
目的條帶。
使用方法
1. 常規(guī)PCR反應體系 (冰上操作)
試劑 | 使用量 | 終濃度 |
2×Taq PCR Mix (含染料) a | 25μl | 1× |
正向引物（10 μM）b | 1~2μl | 0.2~0.4μM |
反向引物（10 μM) b | 1~2μl | 0.2~0.4μM |
模板DNAc | Xμl | |
ddH2O | To 50μl |
a. 需溶解*后使用,，防止離子濃度不均勻,；
b. 引物推薦終濃度為 0.2~0.4μM，效果不佳時可以在 0.1~1μM 濃度范圍內進行調整,；
c. 不同模板反應濃度有所不同,，以 50μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時，一般推薦的使用量為 10~400ng,；當模板為質?；虿《?DNA 時，一般推薦的使用量為 10pg~20ng,。
2. 三步法 PCR 反應程序
3. 二步法 PCR 反應程序
d. 菌落 PCR 時預變性 ≥5min,，更有利于破壁。
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