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LabFect 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑

貨號：T2113

存儲條件：: 4-8℃保存,，有效期一年。每次使用之前請先將本品上下顛倒混勻,。

產(chǎn)品說明：

LabFect Plasmid質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑是專門用于質(zhì)粒DNA細胞轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑,。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細胞,、原代細胞和懸浮細胞,，轉(zhuǎn)染效率在貼壁細胞中高達90%以上（EGFP質(zhì)粒）。LabFect Plasmid 不僅可轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA,，還可轉(zhuǎn)染RNA和小分子DNA,。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制,，對細胞的毒性很低,，轉(zhuǎn)染后細胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便,，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合,，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復合物直接加入培養(yǎng)細胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,，操作十分簡便。

產(chǎn)品特點：

卓yue的細胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種原代細胞,，轉(zhuǎn)染效率高達70%以上,；

極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低,，轉(zhuǎn)染細胞死 亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結(jié)果的影響,，實驗結(jié)果更為客觀,；

操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液,。

注意事項：

因細胞密度隨細胞系不同會有很大差別，且細胞密度直接決定轉(zhuǎn)染效率,，因此請在轉(zhuǎn)染過程中盡量保持同樣的接種比例,，以提高轉(zhuǎn)染重復性。多數(shù)哺乳動物細胞應在37℃,、5%CO2條件下培養(yǎng),。其他的一些細胞系，例如昆蟲細胞，需要在不同的溫度和CO2濃度下進行培養(yǎng),。請根據(jù)具體細胞系選擇最shi培養(yǎng)條件,。應避免包裝反應體系中存在血清，因血清會干擾LabFect與DNA形成復合物 ,。如果轉(zhuǎn)染DNA量較大或者當復合物包裝時反應體系中出現(xiàn)沉淀時, 請將包裝反應體系調(diào)整至1ml進行,。

適用細胞系： 293T，A549,，B16F10,，HEK 293，HeLa,，Hepa 1-6,，Hepa 1cLc7，HepG2,，BHK-21,，BNL.CL2，BRL-3A,，C2C12,，C6， CHO-K1,，Clone 9,，COS-1，COS-7,，Daoy,，DBTRG-05MG，DI- TNC1,，DU 145,，HLF-a，Huh-7,，K562,，KB，KLN 205,，Lυ2 (LLC1),，NCaP-FGC，MCF-7,，MEL,，Neuro-2a，NIH3T3,，OVCAR3,，PC3，PC-12，等,。

試劑盒內(nèi)容物：LabFect 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑

方法步驟（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

1. 細胞接種:

a. 轉(zhuǎn)染前24小時左右對細胞進行鋪板（不含抗生素）,，培養(yǎng)過夜；

b. 確保轉(zhuǎn)染時細胞密度達90%-95%,。

2. LabFect/DNA復合物包裝(該步完成后應立即轉(zhuǎn)染):

a. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基,，并添加適量的轉(zhuǎn)染 試劑(參見附表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。

b. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基,，并添加適量的DNA，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。 (參見附表,。首ci使用建議在附表提供的DNA和轉(zhuǎn)染試劑參考量的基礎上進行優(yōu)化實驗，以摸索兩者之間的最you搭配比例),。

c. 將LabFect-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中,，用移液器 輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。注意： LabFect-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要,，切勿顛倒。

3. 轉(zhuǎn)染:

注意：LabFect在*培養(yǎng)基中(基礎培養(yǎng)基中添加血清)具有最gao的轉(zhuǎn)染效率,，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清培養(yǎng)基,。 a. 如特殊情況，可在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細胞密度太大,、營養(yǎng)不足導致的細胞死亡。

b. 將步驟2制備的復合物滴加至培養(yǎng)基中,。輕輕晃動培養(yǎng)皿以使復合物均勻分布,。

c. 培養(yǎng)4h后，加入1ul溶液A,，輕搖混勻（此步可選,，溶液A另購）。

d. 過夜培養(yǎng)24~48小時,。

e. 注意:如果轉(zhuǎn)染后需要更換新鮮培養(yǎng)基，請于加入LabFect/DNA復合物12~24小時后進行,。培養(yǎng)基更換后,，孵育24~48小時后再進行后續(xù)實驗。

f. 收獲細胞,，進行后續(xù)實驗,。

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴格的質(zhì)量檢驗證明，無生物污染

注意：

本產(chǎn)品僅用于科研實驗

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件