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DiD 高氯酸鹽

產(chǎn)品貨號(hào)：D22031

儲(chǔ)存溫度：?20°C干燥避光

產(chǎn)品描述

DiD，DiO,，DiI,，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu),。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng),，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色,，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散,，最jia濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光）,，DiO（綠色熒光）,，DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析,。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā),，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織,，在活體成像中用來示蹤,。

表1.  DiD，DiO,，DiI,，DiR，DiS的化學(xué)性質(zhì)

使用方法

1. DiD,，DiO,，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM,。

注意：未使用的儲(chǔ)存液保存在-20°C,，避免反復(fù)凍融。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基,，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液,，配制濃度為1～5 µM的工作液。

注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制,?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找最jia條件。

2. 懸浮細(xì)胞染色

（1）懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中

（2）在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘,，不同的細(xì)胞最jia培養(yǎng)時(shí)間不同,。

（3）染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。

（4）傾倒上清液,，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液,。

（5）重復(fù)（3）,，（4）步驟兩次以上,。

3. 粘壁細(xì)胞的染色

（1）使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,，吸走過量培養(yǎng)液,，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞,。

（4）在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘,，不同的細(xì)胞最jia培養(yǎng)時(shí)間不同。

（5）吸干染料工作液,，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次,，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10min,，然后吸干培養(yǎng)基,。

4. 顯微鏡檢測(cè)

（1）DiD，DiO,，DiI,，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

（2）多色染料的同時(shí)檢測(cè),，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007,；

c) DiI,，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀的檢測(cè)

DiD,，DiO,，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,，F(xiàn)L2,，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。