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EagI快速內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號(hào)：F5535s

儲(chǔ)存條件：-20℃

同裂酶：BseX3I, BstZI, EclXI, Eco52I, XmaIII

注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切,；共用一種酶切Buffer，大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度,，輕松應(yīng)對(duì)底物過量或困難模板酶切。此外,，LABLEAD去磷酸化,、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhi100活性，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn),。

活性定義

37℃下，在20ul反應(yīng)體系中,，1ul酶能夠在15 min內(nèi)*消化1ugλDNA (HindIII digest),。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液,；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系,。

失活條件

80℃溫育20min,。

質(zhì)量控制

功能活性檢測(cè)

最shi反應(yīng)溫度下，在20ul反應(yīng)體系中,，1ul LabFD™ EagI能夠在15min內(nèi)*消化1ug  λDNA(HindIII digest)。

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ EagI與1ug λDNA(HindIII digest)共同溫育3h,，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性,。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)

最shi反應(yīng)溫度下,，使用1ul LabFD™ EagI消化底物，回收酶切產(chǎn)物,。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ EagI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài),。

藍(lán)白斑檢測(cè)

將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ EagI消化，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,，涂布在含有對(duì)應(yīng)抗生素,、IPTG和 X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會(huì)生長(zhǎng)出藍(lán)色菌落,，而連接錯(cuò)誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落,。對(duì)于 LabFD™ 系列限制酶而言，白色菌落比例應(yīng)小于 1%,。