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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | P1027 |
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蛋白快速銀染試劑盒
貨號:P1027-20T
存儲條件:常溫,,6個(gè)月有效
產(chǎn)品簡介:
蛋白快速銀染試劑盒是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒,該試劑盒含有增敏步驟,,可明顯降低背景,。其優(yōu)點(diǎn)還在于:1、操作簡單快速,;2,、用于2D凝膠的銀染,并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜檢測,;3,、目的條帶清晰:4、不含甲醇,。
蛋白快速銀染試劑盒操作速度更快,。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
名稱 | 規(guī)格 | 存儲條件 |
試劑A:Silver Stain Sensitizer(500x) | 2x1ml | 常溫 |
試劑(B): Silver Stain (100 x) | 10ml | 常溫,,避光 |
試劑(C):Silver Stain Developer(5x) | 2x100ml | 常溫,,避光 |
試劑(D):Silver Stain Stop Buffer(10x ) | 100ml | 常溫 |
自備材料:
1、水平搖床或側(cè)擺搖床
2,、去離子水(超純)
3,、乙醇、冰乙酸
操作步驟(僅供參考):
1,、準(zhǔn)備工作:以下操作以 8.5x5.5cm,、 厚度為 1.0mm 的凝膠為例,以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn),,一股用量是 25ml,,對于凝膠體積較大的,各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大,。整個(gè)銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行,,搖床轉(zhuǎn)速控制在 60~70rpm。提前配制固定液即按無水乙醇冰乙酸;去離子水=5-1:4的比例配制,。提前配制洗滌液,,即按無水乙醇;去離子水=1:4的比例配制。
2,、水洗:電泳結(jié)束后,,取凝膠放入去離子水中清洗2次,每次5min.
3,、固定:取凝膠放入50~100ml 固定液中,,在搖床上室溫?fù)u動 15~20min,重復(fù)固定步驟1次,。
4,、洗脫:取凝膠放入洗滌液中清洗2 次,每次 5min,。
5,、水洗:去離子水清洗凝膠2次,每次 5min,。
6,、增敏:配制銀染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1ml 加入到 50ml去離子水中,,混勻,,即為 1×Silver Stain Sensitizer,一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。室溫下用 1xSilver Stain Sensitizer 育凝膠 2min,,立即用去離子水清洗凝膠2次,,每次1min。
7,、銀染:配制銀染工作液,,即取Silver Stain(100 x)0.5m1 加入到50ml 去離子水中,混勻,,即得 1× Silver Stain,,一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。 取凝膠入 1 xSilver Stain,, 在搖床上室溫?fù)u動 10~20min,。
8、水洗:棄液,,在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次,,每次 30s, 搖動速度在 60~ 70rpm總的水洗時(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi),。
9,、顯影:配制銀染顯影工作液,即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去離子水中,,混勻,,即為 1x Siver Stain Developer,一般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后,,立即置于 1x Silver Stain Developer 中,,室溫聯(lián)育2~10min,直至蛋白條帶清晰可見,。
般顯色305/后就會出現(xiàn)棕色沅淀,繼續(xù)顯影 2-3min,, 亦可延長至 5min 以上,,如果顯影效果不佳,可重新更換 1xSilver Stain Developer繼續(xù)顯影,。
10,、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度,背景染色,。立即加入銀染終止液,,搖床上搖動 10min,以終止顯色反應(yīng),。(配制銀染終止液,,即取 Silver Stain Stop Buffer(10x)10ml加入到 90ml 去離子水中,混勻,,即為 1x Silver Stain Stop Buffer,,一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完,。)
11、保存:棄終止液,,加入去離子水50ml,,搖床上搖動2-5min,棄液,。短期保存于新鮮去離子水,,長期保存可制備干膠。
注意事項(xiàng)
1,、背景過深:①顯色時(shí)間過長,;②洗滌不充分:③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈;④去離子水的純度過低,!
2,、蛋白條帶較淺:①蛋白的半guang氨酸含量過低:②銀染后水洗時(shí)間過長:③蛋白量較低;④固定后的洗滌時(shí)間不夠,導(dǎo)致乙酸殘留,。
3,、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡:①凝膠沒有被充分漫沒,應(yīng)加入足量溶液:②容器沒有清洗干凈,;③凝膠接觸金厲物質(zhì),;④指紋或其他壓跡。
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