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  熒光染料NO.33258

產(chǎn)品貨號：B2883-1

存儲(chǔ)條件：?20℃ ,，保質(zhì)期3年

產(chǎn)品描述

熒光色素；用于DNA,、染色體和核酸的染色,；熒光染色法和免疫熒光技術(shù)。Hoechst 33258 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,，對細(xì)胞的毒性較低,。Hoechst 33258 常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測,，也可以用于普通的細(xì)胞核染色,，或常規(guī)的DNA染色。

產(chǎn)品性質(zhì)

物理性狀

黃色至深黃色粉末,；溶于水，黃或棕色溶液,，參考濃度為9.80 - 10.20 mg/ml,；熔點(diǎn)＞300℃。

用途

細(xì)胞遺傳學(xué)研究的常用試劑,，熒光染色細(xì)胞的DNA ,，插入DNA的A-T區(qū)，具有低的細(xì)胞毒性,，形成膜滲透性熒光DNA鏈,。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml,。

配制母液

Hoechst 33258溶于水,，溶解度可達(dá)10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存,。

注意事項(xiàng)

1) Hoechst 33258 對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù),。

2) 熒光染料都存在淬滅的問題,，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

3) 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。

4) 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途,！

使用方法    

1.用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液,。

2.固定的細(xì)胞或組織染色：

對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后,，適當(dāng)洗滌去除固定劑,。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色,，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258染色,。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色,。

a)對于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液,，覆蓋住樣品即可,。對于懸浮細(xì)胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻,。室溫放置3-5分鐘,。

b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST,、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,，每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。激發(fā)波長350nm,，發(fā)射波長460nm。

3.活細(xì)胞或組織染色：

a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液,，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液,，對于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液,。

b)在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

c)用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次,。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm,。