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2x Taq PCR Mix（含染料）

產(chǎn)品貨號：T0211

存儲條件：-20℃保存

產(chǎn)品說明

Taq PCR Mix (含染料) 的濃度為 2×，使用方便快捷，能減少 PCR 操作過程中的污染,，使用時只需取適量 2×Taq PCR Mix (含染料),，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補足體積,，使反應體系濃度為 1×,，即可進行 PCR 反應。該 Mix 中的 Taq 為篩選獲得的突變體 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase,，能夠高效擴增 ≤5Kb 的 DNA 片段,，具有良好抑制劑耐受能力，其擴增速度約為普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍,，因此可大幅度減少 PCR 延伸過程所需要的時間,，達到縮短整個 PCR反應的目的。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶,，Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq,，不易出現(xiàn)電泳條帶彌散、拖帶或者片段大小改變等狀況,。本 PCR Mix 中包含兩種染料,，PCR 產(chǎn)物無需添加 Loading Buffer 可直接點樣電泳，且電泳過程中會出現(xiàn)紫色和黃色兩個指示條帶,。該染料不影響 PCR 擴增效率,，但對于需要對 PCR 產(chǎn)物進行吸光度、熒光等光學分析的實驗,，建議在分析前對 PCR 產(chǎn)物進行純化,。PCR產(chǎn)物 3' 端帶 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆,。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶殘留檢測

將酶液與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃ 溫育 4h,，通過 DNA 電泳檢測質(zhì)粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃ 溫育 16 h,，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化,。

穩(wěn)定性測試

室溫存放一周,，無明顯活性改變,。

功能檢測

以擬南芥基因組 DNA 和人基因組 DNA 為模板，擴增 5kb 片段,，30 個循環(huán)后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測可見

目的條帶,。

使用方法

1. 常規(guī)PCR反應體系 (冰上操作)

a. 需溶解wan全后使用，防止離子濃度不均勻,；

b. 引物推薦終濃度為 0.2~0.4μM,，效果不佳時可以在 0.1~1μM 濃度范圍內(nèi)進行調(diào)整；

c. 不同模板最佳反應濃度有所不同，以 50μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時,，一般推薦的使用量為 10~400ng,；當模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時,，一般推薦的使用量為 10pg~20ng,。

2. 三步法 PCR 反應程序

3. 二步法 PCR 反應程序

d. 菌落 PCR 時預變性 ≥5min，更有利于破壁,。