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2x Taq PCR Mix（含染料）

產(chǎn)品貨號：T0211

存儲條件：-20℃保存

產(chǎn)品說明

Taq PCR Mix (含染料) 的濃度為 2×，使用方便快捷,，能減少 PCR 操作過程中的污染,，使用時(shí)只需取適量 2×Taq PCR Mix (含染料)，加入模板和引物,，并加入 ddH2O 補(bǔ)足體積,，使反應(yīng)體系濃度為 1×，即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng),。該 Mix 中的 Taq 為篩選獲得的突變體 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase,，能夠高效擴(kuò)增 ≤5Kb 的 DNA 片段，具有良好抑制劑耐受能力,，其擴(kuò)增速度約為普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍,，因此可大幅度減少 PCR 延伸過程所需要的時(shí)間，達(dá)到縮短整個(gè) PCR反應(yīng)的目的,。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶,，Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq，不易出現(xiàn)電泳條帶彌散,、拖帶或者片段大小改變等狀況,。本 PCR Mix 中包含兩種染料，PCR 產(chǎn)物無需添加 Loading Buffer 可直接點(diǎn)樣電泳,，且電泳過程中會出現(xiàn)紫色和黃色兩個(gè)指示條帶,。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率,，但對于需要對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn),，建議在分析前對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化,。PCR產(chǎn)物 3' 端帶 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆,。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶殘留檢測

將酶液與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃ 溫育 4h,，通過 DNA 電泳檢測質(zhì)粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃ 溫育 16 h,，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化,。

穩(wěn)定性測試

室溫存放一周，無明顯活性改變,。

功能檢測

以擬南芥基因組 DNA 和人基因組 DNA 為模板,，擴(kuò)增 5kb 片段，30 個(gè)循環(huán)后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測可見

目的條帶,。

使用方法

1. 常規(guī)PCR反應(yīng)體系 (冰上操作)

a. 需溶解wan全后使用,，防止離子濃度不均勻；

b. 引物推薦終濃度為 0.2~0.4μM,，效果不佳時(shí)可以在 0.1~1μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整,；

c. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時(shí),，一般推薦的使用量為 10~400ng,；當(dāng)模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時(shí),，一般推薦的使用量為 10pg~20ng,。

2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序

3. 二步法 PCR 反應(yīng)程序

d. 菌落 PCR 時(shí)預(yù)變性 ≥5min，更有利于破壁,。