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NcoI 快速內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號：F5550S

儲存條件：-20℃                                             

同裂酶：Bsp19I

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性,。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA,、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer,，大大簡化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切,。此外,，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhibai活性,，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液,；

37℃溫育,；

參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育 20 min,。

質(zhì)量控制

功能活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，在20ul反應(yīng)體系中，1ul LabFD™  NcoI能夠在15min內(nèi)*消化1ugλDNA,。

超長時間溫育檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™  NcoI與1ugλDNA共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性,。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應(yīng)溫度下，使用1ul LabFD™  NcoI消化底物,，回收酶切產(chǎn)物,。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™  NcoI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

藍(lán)白斑檢測

將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™  NcoI消化,，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,，涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上,。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落,，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于LabFD™系列限制酶而言,，白色菌落比例應(yīng)小于1%,。