目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>內(nèi)切酶>> 快速內(nèi)切酶ClaI
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | F5532S |
|---|---|---|---|
| 儲存條件 | -20℃ |
產(chǎn)品貨號：F5532s
儲存條件：-20℃
同裂酶：BspDI,，BanIII，Bsa29I,，BseCI,，BshVI，BsiXI,，Bsp106I,，BspXI，Bsu15I,，BsuTUI,，ZhoI
注：同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ ClaI | 50ul |
10×LabFD™ Buffer | 1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 1ml |
產(chǎn)品簡介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切,；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度,，輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外,，LABLEAD去磷酸化,、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhi100活性，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接"的體驗,。
建議反應(yīng)條件
1×LabFD™緩沖液；
37℃溫育,；
參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系,。
失活條件
80℃溫育20min。
質(zhì)量控制
功能活性檢測
最shi反應(yīng)溫度下,，在20ul反應(yīng)體系中,，1ul LabFD™ ClaI能夠在15min內(nèi)*消化1ugλDNA(Dam-)。
超長時間溫育檢測
最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ ClaI與1ug λDNA(Dam-)共同溫育3h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性,。
酶切-連接-再酶切檢測
最shi反應(yīng)溫度下,，使用1ul LabFD™ ClaI消化底物，回收酶切產(chǎn)物,。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測
最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ ClaI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài),。
藍白斑檢測
將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ ClaI消化，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細胞,，涂布在含有對應(yīng)抗生素,、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍色菌落,，而連接錯誤（即 DNA 末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落,。對于 LabFD™系列限制酶而言，白色菌落比例應(yīng)小于1%,。
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