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快速內(nèi)切酶NsiI

產(chǎn)品貨號：F5606s

儲存條件：-20℃

同裂酶：EcoT22I, Mph1103I, Zsp2I

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性,。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組,、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA,、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切,。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer,，大大簡化酶切反應(yīng)體系,；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切,。此外,，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性,，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液,；

37℃溫育,；

參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育20min,。

質(zhì)量控制

功能活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，在20ul反應(yīng)體系中,，1ul LabFD™ NsiI能夠在15min內(nèi)*消化1ug λDNA。

超長時(shí)間溫育檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ NsiI與1ug pNsiI DNA共同溫育3h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性,。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，使用1ul LabFD™ NsiI消化底物，回收酶切產(chǎn)物,。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物,。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,，將1ul LabFD™ NsiI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài),。

使用方法

1.DNA快速酶切流程

1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

注：本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切，未純化的PCR具備一定的離子強(qiáng)度,，10xLabFD^TMbuffer加入量可適當(dāng)減少至2ul,。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會影響酶切產(chǎn)物,，因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,，建議酶切前對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴,；

3）37℃溫育15min（質(zhì)粒），或15~30min（PCR產(chǎn)物）,，或30~60min（基因組DNA）,；

4）80℃溫育20min即可使酶失活，停止反應(yīng),。

2.雙酶切或多酶切

1）每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul,，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；

2）所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10,；

3）如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最shi反應(yīng)溫度不同,，應(yīng)先以最shi溫度低的酶開始酶切，再添加最shi溫度較高的酶,，在其最shi反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng),。

3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于20ul，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,，盡量使用水浴,、金屬浴或沙浴,。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。