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ECL超敏發(fā)光液 M

產(chǎn)品貨號：E1070

儲存條件：4℃避光保存,，一年有效,。如果長期不用，可以-20℃保存,。-20℃可以保存更長時(shí)間,。

產(chǎn)品簡介

用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。具有以下特點(diǎn)：

(1)具有極gao靈敏度和高信噪比,可檢測ng水平,；

(2)可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作,；

(3)發(fā)光迅速,熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測,

淬滅時(shí)間長；

(4)可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體,；

(5)保存時(shí)間長,；

使用說明

1、常規(guī)電泳,、轉(zhuǎn)膜,、HRP 標(biāo)記抗體或核酸探針孵育、洗膜,。注意用 HRP 標(biāo)記 IgG 或用一抗-鏈親和素 -生wu素-HRP 夾心法,。核酸雜交膜用 HRP 標(biāo)記探針雜交，洗膜,。

2,、在最hou一次洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合,，放入干凈容器中混合,。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3,、用鑷子取出膜,，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液充分接觸（約 0.125ml 發(fā)光工作液/cm2 膜）,。室溫孵育 3 分鐘后,，準(zhǔn)備立即壓片曝光,。孵育時(shí)間過長不會增加靈敏度，有時(shí)還會導(dǎo)致曝光條帶異常,。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng),，使用過少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上 條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低,。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量,。

4、用鑷子夾起膜,，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液,。但勿洗去發(fā)光液。

5,、在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜,。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包 裹雜交膜,，去除氣泡和皺褶,，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液,。用膠帶將覆蓋 雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),，最hao蛋白帶面向上。

6,、在黑暗中放入 X 感光膠片,，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗,。

注意：

1、步驟 1-5 可在日光燈下操作,；但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低,，移到暗房操作 可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,，保持膜的潔凈,。

2、長時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過量,，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系,。曝光不足則條帶模糊。

3,、發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光,。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光 較弱,，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光,。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間,。肉眼不可見的熒光實(shí)際上 可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時(shí),。如果曝光后條帶不佳,，可用洗膜緩沖液洗膜， 重新孵育二抗,，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光,。

4、由于超敏發(fā)光液的高靈敏度,，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗 1：1000-1：4000,，二抗 1： 2000-1：5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶,，導(dǎo)致失敗,！

5,、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜,，例如“克林萊"牌保鮮膜,。

6、使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確位置 和大小,。

7,、NaN3能抑制 HRP 活性，回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用 NaN3,，如必需使用勿超過 0.01%,。

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