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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 25T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | PFM025 |
Flag-Magnetic 免疫沉淀試劑盒（PROCAP Flag-Magnetic IP/CoIP KIT）
貨號：PFM025
存儲條件：-20°C保存,。Flag-Magnetic beads經(jīng)常使用可在4℃保存,，在-20或-80℃長期保存，避免反復(fù)凍融,。
試劑盒組分：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
FNM-25-1000 | Flag-Nanoab-Magnetic | 1000ul(25T) |
IP001A | 裂解液A | 30ml |
IP001B | 裂解液B | 30ml |
IP001C | 漂洗液C | 30ml |
IP001D | 漂洗液D | 30ml |
IP001E | 洗脫液E | 3x1ml |
CLJ0615 | 磁力架1.5ml,，6孔 | 個 |
產(chǎn)品簡介：
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的納米抗體開發(fā)的,；納米抗體由傳統(tǒng)抗體的重鏈可變區(qū)（VHH）組成，具有分子量小,、親和力高,、特異性強，且耐酸堿高溫環(huán)境等特點,；基于納米抗體的優(yōu)點,，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀結(jié)果出現(xiàn)輕重鏈污染的現(xiàn)象，并且節(jié)省實驗時間,。
實驗步驟：
提示：盡量在4℃進行操作,，洗脫蛋白方法一除外。
1.植物組織裂解處理：
取適量植物組織樣本（葉片等）放置于冷凍液氮中,，之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進行研磨,，盡可能充分研磨破壞其細胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B（需加入PMSF溶液）進行裂解,，為了提高裂解效率,，可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g離心力充分震蕩 30min，裂解完成后 12000 rpm,，離心30min,，吸取上清置于新的離心管中，棄去沉淀,。（進行第3步）
2. 動物細胞裂解
2.1 收集細胞：
根據(jù)實驗要求收集適量的細胞,，通常每個免疫沉淀反應(yīng)大約使用 106-107 個細胞。
2.2 裂解細胞：
根據(jù)實驗要求選擇使用溶液A或溶液B裂解細胞,。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制劑，用500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B重懸細胞,；置于冰上30分鐘,，可每10分鐘充分吹打一次；4℃,，20,000g離心15分鐘,，將裂解產(chǎn)物（上清）轉(zhuǎn)移到一個新的預(yù)冷管中，丟棄沉淀,。
3. 平衡珠子：
振蕩充分混勻珠子,，吸取40μl Flag-Nanoab-Magnetic beads到500μl預(yù)冷的溶液A或溶液B中，4℃,，在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài),，丟棄上清液。（此步驟可選）
3. 結(jié)合蛋白：將平衡好的beads（如果未做第 4 步,，可在細胞裂解產(chǎn)物中直接加入40μl slurry）加入到細胞裂解產(chǎn)物中,，于4℃旋轉(zhuǎn)混合結(jié)合30min-1h,。在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài)，丟棄上清液,。
5. 清洗珠子：
根據(jù)實驗要求選擇使用溶液C或溶液D清洗beads,。4℃，利用磁性分離,，丟棄上清液,。
用500μl預(yù)冷的溶液C或溶液D重懸beads，4℃,，在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài),，丟棄上清液并重復(fù)洗滌 2 次。（可選：在第二次洗滌的步驟中增加鹽濃度到 500 mM）,。
6. 洗脫蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸beads,。95℃，加熱10min充分變性,，F(xiàn)lag-Nanoab-Magnetic Beads 可在磁力架上進行分離,，收集的產(chǎn)物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。
方法二：
加入溶液E洗脫結(jié)合的蛋白,，孵育時間30秒,，期間不斷混勻，利用磁性分離收集上清,，為了中和酸性的甘an酸,，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：為了提高洗脫效率可以重復(fù)這一步,。收集的產(chǎn)物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析,。
注意事項：
1、關(guān)于裂解液與裂解液的選擇：
裂解液A為溫和裂解液,，裂解液B為強裂解液,，請根據(jù)自己實驗樣本選擇相應(yīng)的裂解液，如：若為胞質(zhì)蛋白可選裂解液A或者A與B混合使用,，若為核蛋白則可選擇裂解液B,。
漂洗液C和漂洗液D的選擇：（裂解液D為高鹽溶液，可能會破壞蛋白間較弱的相互作用）,，若兩個蛋白相互作用強,，同時還想減少非特異性結(jié)合，可選D,；若兩個蛋白相互作用弱的優(yōu)先C,。
2、盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當分裝后使用,。
3、本產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品。
4,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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