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一種主動(dòng)式液滴陣列微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)

閱讀:1962      發(fā)布時(shí)間:2022-7-25
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華南理工大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院劉大漁研究員課題組在國(guó)際著名期刊Biosensors and Bioelectronics(2020年影響因子:10.618)在線發(fā)表研究成果( Active droplet-array microfluidics-based chemiluminescence immunoassay  for point-of-care detection of procalcitonin ),,詳細(xì)報(bào)道了課題組開(kāi)發(fā)的主動(dòng)式液滴陣列微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng),,該系統(tǒng)由一臺(tái)緊湊型微流控分析儀和帶有預(yù)加載試劑的微流控芯片組成。微流控分析儀可以在一次運(yùn)行中并行操作五個(gè)微流控芯片,,該分析儀整合了溫度控制,、磁驅(qū)動(dòng)、機(jī)械運(yùn)動(dòng)和光學(xué)檢測(cè)模塊,,確保整個(gè)化學(xué)發(fā)光免疫分析的工作流程可以自動(dòng)化完成,。微流控芯片是由微縫連接的微腔(Microslit-connected microchambers)構(gòu)成,所有試劑都預(yù)先裝入油包水滴中,。此款微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)在檢測(cè)靈敏度,、動(dòng)態(tài)范圍、儀器尺寸及周轉(zhuǎn)時(shí)間等方面具有顯著優(yōu)勢(shì),,非常適合基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用,,確保其在短時(shí)間內(nèi)獲取疾病生物標(biāo)志物信息,。


微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)


一、微流控分析儀

微流控分析儀的尺寸為30cm×30cm×30cm,,重量約為10kg,。該儀器可以在一次運(yùn)行中安裝五個(gè)微流控芯片,允許同時(shí)執(zhí)行五個(gè)測(cè)試,。分析儀包含溫度控制,、磁驅(qū)動(dòng)、機(jī)械運(yùn)動(dòng)和光學(xué)檢測(cè)模塊,。①溫度控制模塊:將微流控芯片所處環(huán)境溫度恒定保持在37℃,,確保抗原抗體結(jié)合效率,;②磁驅(qū)動(dòng)和機(jī)械運(yùn)動(dòng)模塊:通過(guò)程序化移動(dòng)磁柱(magnet column)來(lái)控制磁珠(magnetic beads)的狀態(tài),;③光學(xué)檢測(cè)模塊:使用光電倍增管(PMT)檢測(cè)酶致發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。為避免外部光源對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的干擾,,整個(gè)反應(yīng)在全封閉環(huán)境中運(yùn)行,。當(dāng)反應(yīng)完成后,PMT依次獲取五個(gè)芯片的化學(xué)發(fā)光信號(hào),,曝光時(shí)間為100ms,,信號(hào)強(qiáng)度由儀器軟件直接讀出。

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圖1 (左圖)微流控分析儀照片,;(右圖)微流控分析儀結(jié)構(gòu)示意圖


二,、微流控芯片

微流控芯片是由芯片主體(注塑工藝,黑色聚碳酸酯)和頂蓋(3D打印工藝,,光敏樹(shù)脂)構(gòu)成,。芯片本體(110mm×15mm×5mm)包含5個(gè)微腔,每個(gè)微腔間有0.5mm寬的微縫,。微流控芯片頂蓋設(shè)計(jì)有三個(gè)孔,,從前到后依次是樣品裝載孔、排氣孔和注射孔,,頂蓋底部設(shè)計(jì)有四個(gè)插入微縫的塞子(圖2),。在頂蓋與芯片主體組裝之前,頂蓋內(nèi)表面需涂覆一層納米保護(hù)溶液,。頂蓋位置移動(dòng)可以改變微縫的開(kāi)與關(guān),,該芯片共支持三種位置變化(圖3),這三個(gè)位置分別適用于裝油,、試劑儲(chǔ)存/轉(zhuǎn)運(yùn)和化學(xué)發(fā)光免疫分析,。

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圖2 微流控芯片由芯片本體(黑色)和頂蓋(白色)組成

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圖3 頂蓋的三個(gè)位置狀態(tài)(頂蓋位置移動(dòng)可改變微縫的開(kāi)與關(guān))


微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析操作步驟


微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析包括四個(gè)步驟(圖4、圖5)


1、免疫磁珠捕獲目標(biāo)蛋白:將樣品和磁珠裝入微腔①中孵育3分鐘,,以使樣品中的抗原與磁珠上的捕獲抗體結(jié)合,。
2、形成雙抗夾心結(jié)構(gòu):磁柱(magnet column)上升激活磁珠(magnetic beads),,磁力驅(qū)動(dòng)磁珠經(jīng)過(guò)微縫進(jìn)入微腔②,。將磁珠轉(zhuǎn)移到含有酶標(biāo)記抗體(檢測(cè)抗體)的液滴中孵育3分鐘,磁珠-捕獲抗體-抗原復(fù)合物與檢測(cè)抗體特異性結(jié)合,,形成雙抗體夾心復(fù)合物(磁珠-捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體),。
3、磁珠清洗:驅(qū)動(dòng)磁珠依次進(jìn)入微腔③和微腔④,,微腔③和微腔④含有洗滌緩沖液,,磁珠被洗滌兩次,每次洗滌20秒,。
4、酶化學(xué)發(fā)光反應(yīng):驅(qū)動(dòng)磁珠進(jìn)入含有化學(xué)發(fā)光底物溶液的微腔⑤,。孵育40秒使其產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光后,,PMT收集化學(xué)發(fā)光信號(hào)。


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圖4 微流控芯片中試劑的預(yù)存儲(chǔ)

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圖5 微流控化學(xué)發(fā)光免疫分析的工作流程

磁柱上升,,磁珠激活,;磁柱下降,磁珠失活,。在每個(gè)步驟中,,當(dāng)磁珠進(jìn)入液滴時(shí),磁柱下降,,使磁珠失活,。同時(shí),微流控芯片承載平臺(tái)來(lái)回移動(dòng),,通過(guò)液滴攪拌促進(jìn)磁珠與試劑的相互作用(圖6),。

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圖6 磁驅(qū)動(dòng)液滴操控



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