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固相萃取的工作原理和操作步驟
閱讀：1495 發(fā)布時(shí)間：2023-2-7
固相萃取的基本原理
固相萃取(SPE)是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,，與樣品的基體和干擾化合物分離,，然后再用洗脫液洗脫,，達(dá)到分離和和富集的目的,。先使液體樣品通過(guò)一裝有吸附劑(固相)小柱,，保留其中某些組分,，再選用適當(dāng)?shù)娜軇_洗雜質(zhì),，然后用少量溶劑迅速洗脫，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的,。SPE可以用于所有類(lèi)型樣品的處理,，但是液體樣品是最容易處理的。
固相萃取的分離模式
1.反相固相萃取
-吸附劑(固定相)是非極性或弱極性的,，如硅膠鍵合C18,C8,C4,C2,-苯基等,。流動(dòng)相為極性(水溶液)或中等極性樣品基質(zhì)。
-吸附劑的極性小于洗脫液的極性,。
-應(yīng)用：可以從強(qiáng)極性的溶劑中(如水樣)萃取是非極性或弱極性的化合物,。
-作用機(jī)理：非極性-非極性相互作用，如范德華力或色散力,。
有機(jī)溶劑非極性順序：
正己烷>環(huán)己烷>四氯化碳>甲苯>苯>無(wú)水>氯仿>二氯甲烷>四氫呋喃>乙酸乙酯>丙酮>乙腈>異丙醇>甲醇>水>乙酸
2.正相固相萃取
·吸附劑：極性鍵合相,，如硅膠鍵合-NH2,、-CN,-Diol(二醇基)；極性吸附劑,，如silica florisil,、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等,。流動(dòng)相為中等極性到非極性樣品基質(zhì),。
·作用機(jī)理：
☆極性-極性相互作用
☆表面硅羥基、鋁羥基與極性化合物的極性官能團(tuán)之間相互作用,，包括氫鍵，π-π鍵等,。
☆偶極-偶極相互作用
☆偶極-誘導(dǎo)偶極相互作用
-應(yīng)用：從非極性溶劑樣品中萃取極性化合物除此之外,，還有離子交換萃取和免疫親和兩種分離模式。
固相萃取的操作步驟
一個(gè)完整的固相萃取步驟包括固相萃取柱的預(yù)理,、上樣,、洗去干擾物質(zhì)、洗脫及收集分析物個(gè)步驟,。
1.固相萃取柱的預(yù)處理
·一是為了潤(rùn)濕和活化固相萃取填料,，二是為了除去填料中可能存在的雜
質(zhì)，減少污染,。
·采取的方法是用一定量溶劑沖洗萃取柱,。
·反相類(lèi)型的固相萃取硅膠和非極性吸附劑介質(zhì)，通常用水溶性有機(jī)溶劑如甲醇預(yù)處理,，然后用水或緩沖溶液替換滯留在柱中的甲醇,。
·正相類(lèi)型的固相萃取硅膠和極性吸附劑介質(zhì)，通常用樣品所在的有機(jī)溶劑來(lái)預(yù)處理,。
·離子交換填料一般用3~5mL去離子水或低濃度的離子緩沖溶液來(lái)預(yù)處理,。
·固相萃取填料從預(yù)處理到樣品加入都應(yīng)保持濕潤(rùn)，如果在樣品加人之前,，萃取柱中的填料干了,，需要重復(fù)預(yù)處理過(guò)程。
2.上樣
將樣品倒入活化后的SPE小柱,，然后利用加壓,、抽真空或離心的方法使樣品進(jìn)入吸附劑。采取手動(dòng)或泵以正壓推動(dòng)或負(fù)壓抽吸方式,，使液體樣品以適當(dāng)流速通過(guò)固相萃取柱,，此時(shí)，樣品中的目標(biāo)萃取物被吸附在固相萃取柱填料上,。
3.洗去干擾物質(zhì)
·目的是為了除去吸附在固相萃取柱上的少量基體干擾組分,。
·一般選擇中等強(qiáng)度的混合溶劑,，盡可能除去基體中的干擾組分，又不會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)萃取物流失,。
·反相萃取體系常選用一定比例組成的有機(jī)溶劑-水混合液,，有機(jī)溶劑比例應(yīng)大于樣品溶液而小于洗脫劑溶液。
4.洗脫及收集分析物
-選擇適當(dāng)?shù)南疵撊軇┫疵摫环治鑫?，收集洗脫液,，揮干溶劑以備后用或直接進(jìn)行在線分析。-為了盡可能將分析物洗脫,，使比分析物吸附更強(qiáng)的雜質(zhì)留在SPE柱上,，需要選擇強(qiáng)度合適的洗脫溶劑。