中文名稱：T4 DNA連接酶

英文名稱：T4 DNA Ligase

CAS號(hào)：9015-85-4

分子量：55.3kDa，單體

T4 DNA連接酶

級(jí)別：BR

來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌

活性定義：是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,，37℃,、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位,。1個(gè)粘性末端連接單位：20ul反應(yīng)體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中,，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量）

抑制劑：當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時(shí),，可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性

失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘

注意：T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,，為避免此現(xiàn)象,，電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合,，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存,；轉(zhuǎn)化時(shí)，連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%,；電轉(zhuǎn)化之前,，先用氯fang抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物

質(zhì)量控制：測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶,、核糖核酸酶,、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力

性狀(以下信息僅供參考)：液體,。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,，連接DNA的粘性和平末端,，但該酶對(duì)單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP

用途：本品僅供科研,，不得用于其它用途,。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接,；雙鏈DNA,、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測,；位點(diǎn)特異性突變,；擴(kuò)增片段長度多態(tài)性

保存： -20°C

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