什么是elisa試劑盒,？elisa是一種免疫學(xué)實驗操作實驗，中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附測定實驗,。酶聯(lián)免疫吸附實驗（elisa）是一種用來定量檢測樣本中的某種抗原方法,。因此，因此在許多研究和檢測領(lǐng)域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原,，如使用 ELISA 分析細(xì)胞裂解物,、血樣,、食品等特定物質(zhì)。常見檢測領(lǐng)域包括如生物學(xué),、醫(yī)學(xué),、農(nóng)學(xué)等。

Elisa試劑盒原理

酶聯(lián)免疫吸附實驗（elisa）是一種高敏度的定量實驗,，通常用于測量生物樣品中分析物的濃度,，如細(xì)胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個步驟：

首先是將目標(biāo)分析物捕獲或固定在微孔板上,，然后用目標(biāo)特異性檢測蛋白檢測分析物,，最后就是酶反應(yīng)，既共軛酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物,。根據(jù)不同的捕獲方法和檢測方法,，elisa可以分為四種方法。

elisa方法

ELISA有四種主要的方法：直接法,、間接法,、夾心法和競爭法。每種類型的描述如下,，并用圖說明了分析物和抗體是如何結(jié)合和使用的,。

1.直接法（酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原）

待測抗原粘附在微孔板的孔內(nèi)，然后使用帶酶標(biāo)的一抗與抗原結(jié)合,，最后加入底物進(jìn)行顯色,，并檢測吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復(fù)合物的數(shù)量成一定的線性關(guān)系,。因此,，也就間接的實現(xiàn)了測定抗原數(shù)量的目標(biāo)。

2.間接法（一抗結(jié)合抗原,，酶標(biāo)二抗結(jié)合一抗）

和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體,，結(jié)合抗原的抗體（一抗）不帶酶標(biāo)記物，當(dāng)抗原和抗體結(jié)合后,，再使用帶酶標(biāo)的二抗結(jié)合一抗,，加入底物顯色并檢測。

3.夾心法（捕獲抗體和一抗結(jié)合抗原,，酶標(biāo)二抗結(jié)合一抗）

在間接法基礎(chǔ)上又再發(fā)展出更為復(fù)雜的夾心法,，它在微孔底部預(yù)先包被一種捕獲抗體，用于結(jié)合抗原,，在這個復(fù)合物的基礎(chǔ)上再結(jié)合一抗,、二抗并檢測。

?4.競爭法（酶標(biāo)抗原和抗原競爭結(jié)合抗體）
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??無法同時結(jié)合捕獲抗體和一抗的話，就不適合用夾心檢測,。此時可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體,，同時提供帶標(biāo)記的同種抗原，把待檢測抗原和標(biāo)記抗原一起加入和抗體結(jié)合,，由于兩者會競爭結(jié)合抗體,，所以最終檢測的信號越高，證明代測抗原越少,，反之則越多。

?Elisa試劑盒檢測步驟

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??ELISA 是最jian單的血液檢測之一,。它快速,、快捷，并且需要患者的血液樣本,。ELISA的整個過程如下所述,。
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??抗體附著在作為固體表面的聚苯乙烯板上，并被細(xì)菌,、其他抗體和激素吸引或具有親和力,。
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??將抗原-抗體混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上，然后通過洗滌除去游離抗體,。
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??添加對一抗具有特異性的二抗,，該二抗通常與酶結(jié)合。
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??通過清洗板去除游離的酶聯(lián)二抗,。
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??最后,，添加底物。底物被酶轉(zhuǎn)化形成有色產(chǎn)物,，可以通過分光光度法進(jìn)行測量,。
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??通過ELISA檢測表明懷孕的HCG蛋白,。將血液或尿液樣本和與酶連接的純化 HCG 組合添加到系統(tǒng)中。如果測試樣品中不存在 HCG,，則只有連接的酶與固體表面結(jié)合,。
??

??感興趣的物質(zhì)越多，發(fā)生的反應(yīng)就越多,，與固體表面結(jié)合的連接酶就越少,。這些反應(yīng)通常通過溶液顏色的變化來指示。

?Elisa試劑盒的優(yōu)點

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??以下是 ELISA 技術(shù)的一些優(yōu)點：
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??由于使用了兩種抗體,，從 ELISA 獲取的結(jié)果可以準(zhǔn)確診斷特定疾病,。
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??可以對復(fù)雜的樣品進(jìn)行檢測，因為不需要純化抗原即可檢測,。
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??由于可以進(jìn)行直接和間接分析方法,，因此反應(yīng)靈敏。
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??這是一個快速測試,，很快就能得出結(jié)果,。
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??ELISA 的可能檢測范圍包括定量、半定量,、標(biāo)準(zhǔn)曲線,、定性、校準(zhǔn)曲線模型等,。
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??與需要放射性物質(zhì)存在的其他測定相比,，更容易執(zhí)行且過程簡單。
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??elisa試劑盒是用來檢測什么的

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??Elisa檢測如下：
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??可以確定樣品中抗體和抗原的存在,。
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??它在食品工業(yè)中用于檢測存在的任何食品過敏原,。
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??測定病毒測試中血清抗體的濃度。
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??在 疾病爆發(fā)期間,，為了評估疾病的傳播,，例如在最近的 CO VID-19 爆發(fā)期間，正在使用快速檢測試劑盒來確定血液樣本中是否存在抗體,。
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??ELISA常見問題解答

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??1. 試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫,，會有什么影響？
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??如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫（20～25℃）,，可能會導(dǎo)致溫育時間不夠,，從而使OD值偏低。
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??2. 移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔,，會造成什么后果,？
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??移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，都可能導(dǎo)致加樣量不足，造成OD值偏低,。此外,，吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導(dǎo)致非特異性吸附，進(jìn)一步影響實驗結(jié)果,。
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??3. 操作順序顛倒或遺漏步驟,，會有什么后果？
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??如果操作順序顛倒或遺漏步驟,，很可能導(dǎo)致實驗失敗,，例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等,，使整塊ELISA板都不顯色,。
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??4. 溫育時間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，會有什么影響,？
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??溫育時間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求,，都會影響反應(yīng)的進(jìn)行，導(dǎo)致OD值偏低,。例如,，保溫用的濕盒沒有預(yù)溫，或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等,。
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??5. 洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,，會造成什么后果？
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??洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,，如量筒不干凈,、含有酶抑制物、濃度過高等,，都可能導(dǎo)致洗去特異性結(jié)合物,，使OD值偏低。
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??6. 洗板時沖擊力太大,、浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多,，會有什么影響,？
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??這些操作都可能導(dǎo)致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物，從而使OD值偏低,。
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??7. 加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進(jìn)行讀數(shù),，會有什么影響？
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??這可能導(dǎo)致檢測OD值偏低或偏高,。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù),。
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??8. 酶標(biāo)儀檢測波長設(shè)定有誤，會有什么后果？
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??如果酶標(biāo)儀檢測波長設(shè)定有誤,，例如選用的波長不是產(chǎn)物的敏感吸收峰,，可能會導(dǎo)致OD值偏低或偏高。
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??9. 陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果,，可能的原因是什么,？
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??陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果可能是由于樣品、試劑被污染,，或加樣時操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染,。此外，抗體量過多導(dǎo)致非特異性結(jié)合也可能是一個原因,。
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??10. 酶標(biāo)板整體背景高,，可能的原因是什么？
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??酶標(biāo)板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光,，導(dǎo)致背景信號增強(qiáng),。
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??11. 復(fù)孔之間重復(fù)性差，可能的原因是什么,？
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??復(fù)孔之間重復(fù)性差可能是由于加樣本及試劑量不準(zhǔn),、孔間不一致等原因造成的。此外,，操作條件,、人員等的不一致也可能導(dǎo)致重復(fù)性差。
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??12. 陽性對照值偏低或低吸光度,，可能的原因是什么,？
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??陽性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時間或溫度不夠,、顯色反應(yīng)時間太短,、顯色液變質(zhì)或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的,。