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減少ELISA實驗誤差需注意的地方

時間:2023/4/26閱讀:400
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做任何實驗,,我們能做的就是盡zui大的努力減少實驗誤差,,在ELISA試劑盒實驗操作中,誤差分有系統(tǒng)誤差,、偶然誤差,、過失誤差,而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗,,那么怎樣才能縮小實驗誤差呢,?除了需要細心之外,還有一些需要重點


ELISA試劑盒注意的地方

① 檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗,。能熟練操作實驗儀器,、器械,具有一定總結和分析問題的能力,,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決,。

② 使用校對過的微量移液器,,排除自然誤差,。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

③ 仔細閱讀說明書,,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作,。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,,反復試驗確定成立后才能改進,。

④ 洗滌che底,如若洗板不che底,,酶結合物本底顯色會呈現假陽性,。洗滌液要新鮮,現用現配,,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,,也可能出現假陽性,。

⑤ 嚴控反應時間,反應時間過長,,酶失活,;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,,生成物結構松散不牢固,,容易洗掉,都可能造成假陰性,。

⑥ 注意試劑盒保存期,,過保存期的試劑不能使用。

⑦ 評估試劑的實用性,,試劑的穩(wěn)定與否,,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,,應進行陰,、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用,。

⑧ 嚴格掌握顯色時間,,顯色時間過短,加入終止液反應終止后,,底物結合物的量過少,,易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,,應判為假陽性,,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,,不可報陽性,,這可能是本底顯色的結果。

⑨ 加樣要準確,、快速,。如果加樣不準確,酶生成物的量不能確定,,直接影響顯色結果,。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重,。要求在一定時間內加樣完畢的實驗,,如果加樣遲緩,便出現誤差,,而且試劑長時間暴露在外,,尤其室溫過高時,,保存期會縮短甚至失效。


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