ELISA試驗以靈敏度較高,、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,，如不注意,，有可能導致顯色不全、花板等結果,。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質量,。

操作步驟

可能原因

解決辦法

選擇試劑

選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。

加   樣

1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣,；

2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時),；

3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外,。

1.標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后,，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘,；若在幾天內檢測,，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內,。

2.加樣后及時放入孵箱。

3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干,。

4.如果采用AT或其他全自動加樣,，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5.標本較多時,，請分批操作,。

孵   育

1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā),，吸附于孔壁,，難于清洗徹di；

2.孵育時間人為延長,，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,，難以清洗徹di。

1.貼封片或加蓋,；

2.按說明步驟嚴格控制操作時間,。

洗   板

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。

2.采用半自動洗板機洗板時,，洗液量不足,，導致洗板不徹di；洗板針堵塞,，抽吸不wan全,；洗板不暢，導致洗板效果差,。

3.反應板過多造成洗板等待時間長,。

1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通,，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈,、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；

2.合理安排,，或多用幾臺洗板機,。

顯   色

1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑,；

2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

1. 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；

2. 加樣時保持顯色劑不外流,；

3.A,、B液應避免接觸金屬器械。

終   止

加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,，導致假陽性增加,。

加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。

讀   板

讀板時板底不清潔,。

應保證酶標板清潔,。

全過程

1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;

2.實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量,。

    在實際操作中,，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作,，同時作好室內質控,、室間質評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,，才能保證檢測質量?，F(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測,、提高檢測質量起到了重要作用。