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很多ELISA實(shí)驗(yàn)新手客戶都會(huì)咨詢我司技術(shù)能否把全血提取出來放-70℃條件保存,,等實(shí)驗(yàn)開展了(比如一個(gè)月左右的時(shí)間)再離心全血取血清或者血漿做ELISA實(shí)驗(yàn)?這種做法我司技術(shù)都是持反對(duì)建議的,。與此同時(shí),,也是明確要求我司銷售人員在與客戶售前溝通時(shí)建議老師全血樣本提取好了應(yīng)該及時(shí)離心出血清或者血漿。并要求-70℃條件下保存,,如果一個(gè)月左右可以開展實(shí)驗(yàn)可以-20℃保存,,期間不能反復(fù)凍融。至于凍存后的全血不可以再提取血清,、血漿樣本來做elisa的具體原因如下:
1.全血凍存后解凍,,用常規(guī)離心方式提取血清仍然是可以的,不利的一點(diǎn)是,,伴隨凍融的過程,,會(huì)出現(xiàn)比較嚴(yán)重的溶血事件。而后提取出來的血清能否做elisa,,主要取決于溶血程度,、你所要檢測(cè)的目標(biāo)蛋白的性質(zhì)及你實(shí)驗(yàn)的目的。
2.溶血釋放的胞內(nèi)組分往往容易影響本底,,甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性,;而蛋白酶的釋放可能導(dǎo)致目的蛋白的降解影響結(jié)果;目的蛋白的大小,、穩(wěn)定性,、特異性(相對(duì)抗體而言)又影響其自身與酶標(biāo)板的吸附、自身降解,、自身與抗體的結(jié)合率等等,。以上各種不確定性因素存在下,,如果你只是對(duì)血清中某種血清蛋白做定性檢測(cè)的話,,做elisa應(yīng)該問題不大;若是定量分析的話,,從可靠性的角度上看,,不建議該做法。
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