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當(dāng)前位置:上??撇┤鹕锟萍加邢薰?/a>>>技術(shù)文章>>Elisa實驗中的洗滌步驟不可馬虎
Elisa實驗中的洗滌步驟不可馬虎,佰利萊生物來幫忙,,在操作Elisa實驗中,,每一步都務(wù)必按照說明書進行操作,如有不清楚的地方,,可咨詢我公司,,我司提供全程指導(dǎo),購買我司ELisa試劑盒可提供代測服務(wù),。
洗滌在Elisa過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,,但卻決定著實驗的成敗,。Elisa就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應(yīng)引起操作者的高度重視,,
操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎,。
洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,,也含親水基團,,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,, 其濃度可在0. 05%-0. 2%之間,高于0. 2%時,,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附
而減低試驗的靈敏度,。
洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,,應(yīng)按要求稀釋,,所用的水電導(dǎo)率在1. 5us/cm之下,洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制,。保證洗板浸泡時間為40秒左右,,孔內(nèi)液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡,。
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