破傷風(fēng)桿菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。

破傷風(fēng)桿菌PCR檢測試劑盒
具有下列特點(diǎn)：
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí)，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。
3.即開即用,，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染,。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR,。
6.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
規(guī)格及成分                            成分
 2×qPCR MagicMix                 500 μL（裝 A 袋）
微量核酸稀釋液（熒光 PCR 專用）1 mL（裝 A 袋）
PCR 引物混合物                        100 μL（裝 A 袋）
基因陽性對(duì)照                           50 μL（裝 B 袋）
DNA 病毒裂解液（試用裝）       15 次（9 mL）
使用手冊(cè)                              1 份
運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸,、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū),、B 袋的陽性對(duì)照分開放置)，
自備試劑DNA 模板,、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定,，具體見使用方法）。
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout,。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7,，6,，5,，4，3,，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。5.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
6.換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。
7.換槍頭，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。
牛巴貝斯蟲PCR試劑盒設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù),，下表只列出一次,。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后*后加）：
注:僅 ABI7500,、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option,、MJ Chromo4,、MX3000、MX4000,、RotorGene3000,、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，則用水替代,。
10. 蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行
優(yōu)化）。
過程溫度時(shí)間
預(yù)變性95℃1 分鐘
PCR 反應(yīng)95℃15 秒
（30 個(gè)循環(huán)）60℃15 秒
72℃15 秒
11. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行,。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí),，
吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500 nm,，發(fā)射光
譜在 530 nm,。
四、數(shù)據(jù)處理
12. 以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品
的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度,。
相關(guān)產(chǎn)品：