"鼠疫桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。

鼠疫桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

具有下列特點(diǎn)：

1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng),。

2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí),，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

3.即開即用,，用戶只需要提供樣品模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。

4.一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),，避免后續(xù)污染,。

5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6.本產(chǎn)品只適用于科研,，不能用于臨床診斷,。

規(guī)格及成分                            成分

2×qPCR MagicMix                 500 μL（裝 A 袋）

微量核酸稀釋液（熒光 PCR 專用）1 mL（裝 A 袋）

PCR 引物混合物                        100 μL（裝 A 袋）

基因陽(yáng)性對(duì)照                           50 μL（裝 B 袋）

DNA 病毒裂解液（試用裝）       15 次（9 mL）

使用手冊(cè)                              1 份

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū),、B 袋的陽(yáng)性對(duì)照分開放置),，

自備試劑DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定,，具體見使用方法）,。

樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。

稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照,。

2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2,。

3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。

4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。5.換槍頭,，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。

6.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。

7.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 4 號(hào)管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。

牛巴貝斯蟲PCR試劑盒設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9.在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次,。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后*后加）：

注:僅 ABI7500、7700 和 7900

儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ,、MJ Option、MJ Chromo4,、MX3000,、MX4000、RotorGene3000,、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX,，則用水替代。

10. 蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)

儀器不同而自行

優(yōu)化）,。

過(guò)程溫度時(shí)間

預(yù)變性95℃1 分鐘

PCR 反應(yīng)95℃15 秒

（30 個(gè)循環(huán)）60℃15 秒

72℃15 秒

11. 數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用

儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí),，

吸收光譜在 471 nm,，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500 nm，發(fā)射光

譜在 530 nm,。

四,、數(shù)據(jù)處理

12. 以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測(cè)樣品

的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

相關(guān)產(chǎn)品：