酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。該法是以固相載體吸附技術(shù)和免疫酶技術(shù)相結(jié)合建立的一種檢測方法，其操作簡便,，無需特殊設(shè)備,，并具有高度的敏感性和準(zhǔn)確性,，所以受到大家的廣泛重視,，以致在較短時間內(nèi)，于國內(nèi)外均取得了較快的進展,。

(一) 主要的技術(shù)類型 ELISA的技術(shù)類型很多,，但以檢測抗體的間接法，及測定抗原的雙抗體夾心法最chang用,，現(xiàn)將其操作流程分別簡介如下,。

1. 間接法首先將已知標(biāo)準(zhǔn)抗原吸附在聚苯乙烯塑料反應(yīng)板的相應(yīng)孔中，然后加入被檢血清,，在溫箱中作用一定時間,，使形成的抗原抗體復(fù)合物均勻地附著在固相載體上，再滴加用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗免疫球蛋白,，則與固相載體上的抗原抗體復(fù)合物的抗體結(jié)合,，當(dāng)加入底物溶液時,，H2O2在酶的催化下氧化，同時使無色的顯色劑鄰苯二胺(OPD)脫氫氧化,，形成可溶性的氧化型棕色聯(lián)苯胺,，產(chǎn)生的顏色強度的差別，可用肉眼或特制的72型分光光度計檢測,，由此推算出被檢血清中是否有相應(yīng)抗體,，以及含量的多少。

2. 雙抗體夾心法首先將已知抗體球蛋白吸附在載體上,，致敏后,，沖洗除去多余抗體，滴加被測抗原,，致敏后,，沖去過剩抗原,，滴加酶標(biāo)抗體,，室溫下致敏后，沖洗除去過剩的標(biāo)記抗體,，加入底物溶液顯色后，再加入終止劑,，以終止反應(yīng)的進行,，最后根據(jù)反應(yīng)孔中顏色的深淺，對被檢抗原作出檢定,。

(二) 在微生物檢測方面的應(yīng)用   ELISA技術(shù)問世以來,，已廣泛用于各種病原微生物，如病毒,、細(xì)菌,、真菌、支原體,、立克次氏體,、衣原體、螺旋體等及其抗體的檢測,，在微生物檢測和疾病診斷方面發(fā)揮了重要作用,，通過試劑和檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化，組裝的ELISA診斷試劑盒,，已在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,。

(三) ELISA的特點 靈敏度高，檢測能力可達10-6mg/ml水平,；應(yīng)用范圍廣,，既能檢測抗原又能檢測抗體,，既能定性又能定量；有效期長,，酶標(biāo)抗體于普通冰箱中可保存一年以上,，效價不下降，制成的標(biāo)本,，可長久保存,，供隨時復(fù)查用。

［附］： 免疫酶染色法(組化法) 該法的原理與免疫熒光法相似,，不同之處在于用酶標(biāo)記的抗體,，稱酶標(biāo)抗體。酶標(biāo)抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合,，當(dāng)加入酶的底物時,，底物在酶的催化下，發(fā)生組織化學(xué)反應(yīng),，產(chǎn)生有色物質(zhì),，該物質(zhì)不需特殊儀器，在光學(xué)顯微鏡下即能觀察,，目前常用的酶是HRP,，底物為DAB，可生成棕褐色沉淀物,，使玻片組織標(biāo)本上的抗原所在部位呈現(xiàn)顏色,。