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1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理,，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法,，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別,，信號輸出和數(shù)據(jù)處理,。

2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標記物,，病毒,，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面,。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）,、熒光或放射性標記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號。后利用信號強度,，標準樣品濃度梯度等信息計算得出待測樣中目標抗原的濃度,。

3.分類：根據(jù)免疫識別和信號輸出方式的不同，ELISA可以分為雙抗體夾心法,、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等,。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應用上常見。

大鼠封閉蛋白(Claudin)ELISA試劑盒注意事項：

1.所有的操作過程一般都用排槍處理,，在操作過程中,，排槍吸兩檔打一檔，會防止氣泡的產(chǎn)生,，并且操作時一定要保證槍頭每步都要插緊,，選擇配套的槍頭尤為重要，槍頭容易掉,，影響實驗效果,，此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊,，避免槍頭松動自己卻不知。

2.在處理稀釋標準品的過程中,，要在渦旋儀上點一下,，使混勻，但振蕩過程不宜過長,，防止出現(xiàn)蛋白質(zhì)降解變性的現(xiàn)象

3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關重要的作用,，每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個預實驗，設置不同的二抗?jié)舛群惋@色時間,，從而確定相應的條件,，方可做好大規(guī)模的篩選細胞工作。

4.同種細胞株的ELISA孵育時間要保持一致,，降低無關變量的影響,。

5.各種抗體的保存是在-80度冰箱，一定要將降低凍融次數(shù),，蛋白比較敏感,，凍融次數(shù)多，蛋白活性就會降低,。

6.稀釋樣品時一定要保證混勻,，槍尖在液面以下吹打相同的次數(shù)，可防止出現(xiàn)氣泡,。

7.分析數(shù)據(jù)的過程中,，一般至少要5個點，不然數(shù)據(jù)沒有相應的說服力,。

8.96孔板取完樣品后,，蓋好，提早加好DPBS稀釋液,，防止時間過長，樣品揮發(fā),，濃度不準,。
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