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1.原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理,,對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,,分三個(gè)部分組成:免疫識別,,信號輸出和數(shù)據(jù)處理。
2.步驟:免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體,,而后利用抗體識別待測的抗原(通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物,,病毒,細(xì)菌等等,,從復(fù)雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面,。接著用帶有辣根過氧化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號,。后利用信號強(qiáng)度,,標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度梯度等信息計(jì)算得出待測樣中目標(biāo)抗原的濃度。
3.分類:根據(jù)免疫識別和信號輸出方式的不同,,ELISA可以分為雙抗體夾心法,、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應(yīng)用上常見,。
人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.所有的操作過程一般都用排槍處理,,在操作過程中,排槍吸兩檔打一檔,,會(huì)防止氣泡的產(chǎn)生,,并且操作時(shí)一定要保證槍頭每步都要插緊,選擇配套的槍頭尤為重要,,槍頭容易掉,,影響實(shí)驗(yàn)效果,此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊,,避免槍頭松動(dòng)自己卻不知,。
2.在處理稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的過程中,要在渦旋儀上點(diǎn)一下,,使混勻,,但振蕩過程不宜過長,防止出現(xiàn)蛋白質(zhì)降解變性的現(xiàn)象
3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關(guān)重要的作用,,每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),,設(shè)置不同的二抗?jié)舛群惋@色時(shí)間,從而確定相應(yīng)的條件,,方可做好大規(guī)模的篩選細(xì)胞工作,。
4.同種細(xì)胞株的ELISA孵育時(shí)間要保持一致,,降低無關(guān)變量的影響。
5.各種抗體的保存是在-80度冰箱,,一定要將降低凍融次數(shù),,蛋白比較敏感,凍融次數(shù)多,,蛋白活性就會(huì)降低,。
6.稀釋樣品時(shí)一定要保證混勻,槍尖在液面以下吹打相同的次數(shù),,可防止出現(xiàn)氣泡,。
7.分析數(shù)據(jù)的過程中,一般至少要5個(gè)點(diǎn),,不然數(shù)據(jù)沒有相應(yīng)的說服力,。
8.96孔板取完樣品后,蓋好,,提早加好DPBS稀釋液,,防止時(shí)間過長,,樣品揮發(fā),,濃度不準(zhǔn)。
免責(zé)聲明:
1. 試劑盒僅供研究使用,,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),,本公司概不負(fù)責(zé),。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。
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