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1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理,，對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法,，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別,，信號輸出和數(shù)據(jù)處理,。

2.步驟：免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物,，病毒,，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面,。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）,、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識(shí)別信號。后利用信號強(qiáng)度,，標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度梯度等信息計(jì)算得出待測樣中目標(biāo)抗原的濃度,。

3.分類：根據(jù)免疫識(shí)別和信號輸出方式的不同，ELISA可以分為雙抗體夾心法,、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等,。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應(yīng)用上常見。

小鼠抗ⅢELISA試劑盒注意事項(xiàng)：

1.所有的操作過程一般都用排槍處理,，在操作過程中,，排槍吸兩檔打一檔，會(huì)防止氣泡的產(chǎn)生,，并且操作時(shí)一定要保證槍頭每步都要插緊，選擇配套的槍頭尤為重要,，槍頭容易掉,，影響實(shí)驗(yàn)效果，此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊,，避免槍頭松動(dòng)自己卻不知,。

2.在處理稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的過程中,，要在渦旋儀上點(diǎn)一下，使混勻,，但振蕩過程不宜過長,，防止出現(xiàn)蛋白質(zhì)降解變性的現(xiàn)象

3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關(guān)重要的作用，每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),，設(shè)置不同的二抗?jié)舛群惋@色時(shí)間,，從而確定相應(yīng)的條件，方可做好大規(guī)模的篩選細(xì)胞工作,。

4.同種細(xì)胞株的ELISA孵育時(shí)間要保持一致,，降低無關(guān)變量的影響。

5.各種抗體的保存是在-80度冰箱,，一定要將降低凍融次數(shù),，蛋白比較敏感，凍融次數(shù)多,，蛋白活性就會(huì)降低,。

6.稀釋樣品時(shí)一定要保證混勻，槍尖在液面以下吹打相同的次數(shù),，可防止出現(xiàn)氣泡,。

7.分析數(shù)據(jù)的過程中，一般至少要5個(gè)點(diǎn),，不然數(shù)據(jù)沒有相應(yīng)的說服力,。

8.96孔板取完樣品后，蓋好,，提早加好DPBS稀釋液,，防止時(shí)間過長，樣品揮發(fā),，濃度不準(zhǔn),。
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